昆虫学报
昆蟲學報
곤충학보
ACTA ENTOMOLOGICA SINICA
2006年
6期
944-949
,共6页
马彩霞%李梅%邱星辉%何凤琴%刘惠霞
馬綵霞%李梅%邱星輝%何鳳琴%劉惠霞
마채하%리매%구성휘%하봉금%류혜하
棉铃虫%细胞色素P450%CYP6B7%基因克隆%融合表达
棉鈴蟲%細胞色素P450%CYP6B7%基因剋隆%融閤錶達
면령충%세포색소P450%CYP6B7%기인극륭%융합표체
细胞色素P450 CYP6B7被推测与棉铃虫Helicoverpa armigera对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性有关,但至今尚无CYP6B7参与杀虫剂代谢方面的直接证据.为揭示CYP6B7的代谢功能,作者以棉铃虫幼虫基因组DNA 为模板,以CYP6B7基因设计特异性引物,扩增出包含321 bp内含子的CYP6B7基因.用反向PCR的方法消除内含子,获得包含完整的CYP6B7基因的开放阅读框.将CYP6B7基因与pMAL-c2X载体连接,并转化E.coli TB1细胞,在IPTG诱导下,CYP6B7能与载体基因编码的麦芽糖结合蛋白(MBP)在大肠杆菌中融合表达,表达产物经直链淀粉(amylose) 柱亲和层析分离洗脱后,得到SDS-PAGE电泳纯的融合蛋白.
細胞色素P450 CYP6B7被推測與棉鈴蟲Helicoverpa armigera對擬除蟲菊酯類殺蟲劑的抗性有關,但至今尚無CYP6B7參與殺蟲劑代謝方麵的直接證據.為揭示CYP6B7的代謝功能,作者以棉鈴蟲幼蟲基因組DNA 為模闆,以CYP6B7基因設計特異性引物,擴增齣包含321 bp內含子的CYP6B7基因.用反嚮PCR的方法消除內含子,穫得包含完整的CYP6B7基因的開放閱讀框.將CYP6B7基因與pMAL-c2X載體連接,併轉化E.coli TB1細胞,在IPTG誘導下,CYP6B7能與載體基因編碼的麥芽糖結閤蛋白(MBP)在大腸桿菌中融閤錶達,錶達產物經直鏈澱粉(amylose) 柱親和層析分離洗脫後,得到SDS-PAGE電泳純的融閤蛋白.
세포색소P450 CYP6B7피추측여면령충Helicoverpa armigera대의제충국지류살충제적항성유관,단지금상무CYP6B7삼여살충제대사방면적직접증거.위게시CYP6B7적대사공능,작자이면령충유충기인조DNA 위모판,이CYP6B7기인설계특이성인물,확증출포함321 bp내함자적CYP6B7기인.용반향PCR적방법소제내함자,획득포함완정적CYP6B7기인적개방열독광.장CYP6B7기인여pMAL-c2X재체련접,병전화E.coli TB1세포,재IPTG유도하,CYP6B7능여재체기인편마적맥아당결합단백(MBP)재대장간균중융합표체,표체산물경직련정분(amylose) 주친화층석분리세탈후,득도SDS-PAGE전영순적융합단백.
