细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2007年
7期
612-615
,共4页
江秀玲%毕富勇%王华茂%石必枝%张捷%汪茗%李宗海
江秀玲%畢富勇%王華茂%石必枝%張捷%汪茗%李宗海
강수령%필부용%왕화무%석필지%장첩%왕명%리종해
NIH3T3%表皮生长因子受体突变体Ⅲ%稳定细胞系%免疫原性%抗体
NIH3T3%錶皮生長因子受體突變體Ⅲ%穩定細胞繫%免疫原性%抗體
NIH3T3%표피생장인자수체돌변체Ⅲ%은정세포계%면역원성%항체
目的:建立表皮生长因子突变体Ⅲ胞外区(EGFRvⅢex)的NIH3T3稳定细胞系并分析其免疫原性.方法:将编码EGFRvⅢex基因的表达质粒pLNCX2-EGFRvⅢex转染NIH3T3细胞后, 用G418筛选阳性克隆, 得到多个细胞克隆.采用免疫组化和Western blot法鉴定这些细胞克隆.选取高表达EGFRvⅢex的细胞株(命名为3T3-vⅢex)免疫BALB/c小鼠, 制备抗血清.用ELISA、Western blot和免疫荧光分别检测抗血清的效价和特异性.结果:成功地构建了真核表达载体pLNCX2-EGFRvⅢex并获得了稳定高表达EGFRvⅢex的NIH3T3细胞系3T3-vⅢex.用3T3-vⅢex免疫小鼠所获得的抗血清效价为10 -5.Western blot和免疫荧光鉴定证明抗血清可以与EGFRvⅢex特异结合.结论:人EGFRvⅢex可在NIH3T3细胞内获得稳定表达, 以其免疫小鼠可以获得高效价、高特异性的抗血清.
目的:建立錶皮生長因子突變體Ⅲ胞外區(EGFRvⅢex)的NIH3T3穩定細胞繫併分析其免疫原性.方法:將編碼EGFRvⅢex基因的錶達質粒pLNCX2-EGFRvⅢex轉染NIH3T3細胞後, 用G418篩選暘性剋隆, 得到多箇細胞剋隆.採用免疫組化和Western blot法鑒定這些細胞剋隆.選取高錶達EGFRvⅢex的細胞株(命名為3T3-vⅢex)免疫BALB/c小鼠, 製備抗血清.用ELISA、Western blot和免疫熒光分彆檢測抗血清的效價和特異性.結果:成功地構建瞭真覈錶達載體pLNCX2-EGFRvⅢex併穫得瞭穩定高錶達EGFRvⅢex的NIH3T3細胞繫3T3-vⅢex.用3T3-vⅢex免疫小鼠所穫得的抗血清效價為10 -5.Western blot和免疫熒光鑒定證明抗血清可以與EGFRvⅢex特異結閤.結論:人EGFRvⅢex可在NIH3T3細胞內穫得穩定錶達, 以其免疫小鼠可以穫得高效價、高特異性的抗血清.
목적:건립표피생장인자돌변체Ⅲ포외구(EGFRvⅢex)적NIH3T3은정세포계병분석기면역원성.방법:장편마EGFRvⅢex기인적표체질립pLNCX2-EGFRvⅢex전염NIH3T3세포후, 용G418사선양성극륭, 득도다개세포극륭.채용면역조화화Western blot법감정저사세포극륭.선취고표체EGFRvⅢex적세포주(명명위3T3-vⅢex)면역BALB/c소서, 제비항혈청.용ELISA、Western blot화면역형광분별검측항혈청적효개화특이성.결과:성공지구건료진핵표체재체pLNCX2-EGFRvⅢex병획득료은정고표체EGFRvⅢex적NIH3T3세포계3T3-vⅢex.용3T3-vⅢex면역소서소획득적항혈청효개위10 -5.Western blot화면역형광감정증명항혈청가이여EGFRvⅢex특이결합.결론:인EGFRvⅢex가재NIH3T3세포내획득은정표체, 이기면역소서가이획득고효개、고특이성적항혈청.
