西北农林科技大学学报（自然科学版）
西北農林科技大學學報（自然科學版）
서북농림과기대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF NORTHWEST SCI-TECH UNIVERSITY OF AGRICULTURE AND FORESTRY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2008年
5期
97-102
,共6页
阮小凤%Gabi Krczal%杨勇
阮小鳳%Gabi Krczal%楊勇
원소봉%Gabi Krczal%양용
柿%微卫星%磁珠富集
柿%微衛星%磁珠富集
시%미위성%자주부집
[目的]分离柿属植物的微卫星标记,为柿种质资源的分类、进化等遗传研究奠定基础.[方法]提取磨盘柿(Diospyros kaki)基因组DNA后,用EcoR Ⅰ和Mes Ⅰ 2种内切酶酶切并连接接头,再用接头特异引物进行PCR扩增.扩增产物与生物素标记的(GA)15和(AC)15探针杂交,杂交复合物用链亲和素包裹磁珠进行结合,得到单链DNA目标片段,经PCR扩增.连接pGEM-T载体,转化入感受态大肠杆菌,得到微卫星富集小插入片段DNA文库.用Colony-PCR法筛选阳性克隆,进行测序分析.[结果]测序96个克隆,54个含微卫星序列,24个为有效微卫星序列,其中完美型(perfect)9个,占37.5%;非完美型(imperfect)7个,占29.2%;混合型(compound)8个,占33.3%.(GA)n重复最为常见.21条含微卫星序列已登录GenBank(Accession Number:EF567396～EF567416).成功设计21对引物,经初步筛选,14对表现出多态性.[结论]试验方法分离柿基因组微卫星简便有效,得到的多态性引物可用于柿种质资源的遗传研究.
[目的]分離柿屬植物的微衛星標記,為柿種質資源的分類、進化等遺傳研究奠定基礎.[方法]提取磨盤柿(Diospyros kaki)基因組DNA後,用EcoR Ⅰ和Mes Ⅰ 2種內切酶酶切併連接接頭,再用接頭特異引物進行PCR擴增.擴增產物與生物素標記的(GA)15和(AC)15探針雜交,雜交複閤物用鏈親和素包裹磁珠進行結閤,得到單鏈DNA目標片段,經PCR擴增.連接pGEM-T載體,轉化入感受態大腸桿菌,得到微衛星富集小插入片段DNA文庫.用Colony-PCR法篩選暘性剋隆,進行測序分析.[結果]測序96箇剋隆,54箇含微衛星序列,24箇為有效微衛星序列,其中完美型(perfect)9箇,佔37.5%;非完美型(imperfect)7箇,佔29.2%;混閤型(compound)8箇,佔33.3%.(GA)n重複最為常見.21條含微衛星序列已登錄GenBank(Accession Number:EF567396～EF567416).成功設計21對引物,經初步篩選,14對錶現齣多態性.[結論]試驗方法分離柿基因組微衛星簡便有效,得到的多態性引物可用于柿種質資源的遺傳研究.
[목적]분리시속식물적미위성표기,위시충질자원적분류、진화등유전연구전정기출.[방법]제취마반시(Diospyros kaki)기인조DNA후,용EcoR Ⅰ화Mes Ⅰ 2충내절매매절병련접접두,재용접두특이인물진행PCR확증.확증산물여생물소표기적(GA)15화(AC)15탐침잡교,잡교복합물용련친화소포과자주진행결합,득도단련DNA목표편단,경PCR확증.련접pGEM-T재체,전화입감수태대장간균,득도미위성부집소삽입편단DNA문고.용Colony-PCR법사선양성극륭,진행측서분석.[결과]측서96개극륭,54개함미위성서렬,24개위유효미위성서렬,기중완미형(perfect)9개,점37.5%;비완미형(imperfect)7개,점29.2%;혼합형(compound)8개,점33.3%.(GA)n중복최위상견.21조함미위성서렬이등록GenBank(Accession Number:EF567396～EF567416).성공설계21대인물,경초보사선,14대표현출다태성.[결론]시험방법분리시기인조미위성간편유효,득도적다태성인물가용우시충질자원적유전연구.
