细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2009年
2期
145-149
,共5页
赵小玲%陈伟强%李静梅%张素娟%田露芳%王亮%弓景波%杨志华
趙小玲%陳偉彊%李靜梅%張素娟%田露芳%王亮%弓景波%楊誌華
조소령%진위강%리정매%장소연%전로방%왕량%궁경파%양지화
核糖体展示%人源抗体%TNF-α%类风湿性关节炎
覈糖體展示%人源抗體%TNF-α%類風濕性關節炎
핵당체전시%인원항체%TNF-α%류풍습성관절염
目的:构建人源核糖体展示抗体库,筛选制备抗TNF-α的特异性、高亲和力三结构域抗体(VH/K).方法:应用核糖体抗体库技术,从类风湿关节炎患者的外周血淋巴细胞中分离、构建核糖体展示VH/K基因库;体外转录翻译后,以TNF-α重组蛋白作纯化抗原,采用亲和富集法淘选TNF-α特异性抗体基因;将筛选获得的VH/K基因克隆并在原核系统pET22b(+)/BL21(DE3)中实现可溶性表达;表达产物经进行ELISA鉴定,并对阳性克隆的生物学特性进行初步研究.结果:成功构建了库容量约为6.7×1012核糖体展示VH/K抗体基因库,在180个筛选克隆中,其中两株抗体TRB21、TRB409显示出极高的ELISA值,序列分析表明两株克隆具有全新的人源抗以TNF-α抗体基因,他们不仅可以特异识别TNF-α而且可以抑制以TNF-α对L929细胞的细胞毒性.结论:人源抗TNF-α特异性抗体的获得,为进一步研制抗TNF-α的特异性、高亲和力基因工程抗体奠定了基础.核糖体展示技术为体外筛选制备全人源抗体提供了一种简便、有效的技术平台.
目的:構建人源覈糖體展示抗體庫,篩選製備抗TNF-α的特異性、高親和力三結構域抗體(VH/K).方法:應用覈糖體抗體庫技術,從類風濕關節炎患者的外週血淋巴細胞中分離、構建覈糖體展示VH/K基因庫;體外轉錄翻譯後,以TNF-α重組蛋白作純化抗原,採用親和富集法淘選TNF-α特異性抗體基因;將篩選穫得的VH/K基因剋隆併在原覈繫統pET22b(+)/BL21(DE3)中實現可溶性錶達;錶達產物經進行ELISA鑒定,併對暘性剋隆的生物學特性進行初步研究.結果:成功構建瞭庫容量約為6.7×1012覈糖體展示VH/K抗體基因庫,在180箇篩選剋隆中,其中兩株抗體TRB21、TRB409顯示齣極高的ELISA值,序列分析錶明兩株剋隆具有全新的人源抗以TNF-α抗體基因,他們不僅可以特異識彆TNF-α而且可以抑製以TNF-α對L929細胞的細胞毒性.結論:人源抗TNF-α特異性抗體的穫得,為進一步研製抗TNF-α的特異性、高親和力基因工程抗體奠定瞭基礎.覈糖體展示技術為體外篩選製備全人源抗體提供瞭一種簡便、有效的技術平檯.
목적:구건인원핵당체전시항체고,사선제비항TNF-α적특이성、고친화력삼결구역항체(VH/K).방법:응용핵당체항체고기술,종류풍습관절염환자적외주혈림파세포중분리、구건핵당체전시VH/K기인고;체외전록번역후,이TNF-α중조단백작순화항원,채용친화부집법도선TNF-α특이성항체기인;장사선획득적VH/K기인극륭병재원핵계통pET22b(+)/BL21(DE3)중실현가용성표체;표체산물경진행ELISA감정,병대양성극륭적생물학특성진행초보연구.결과:성공구건료고용량약위6.7×1012핵당체전시VH/K항체기인고,재180개사선극륭중,기중량주항체TRB21、TRB409현시출겁고적ELISA치,서렬분석표명량주극륭구유전신적인원항이TNF-α항체기인,타문불부가이특이식별TNF-α이차가이억제이TNF-α대L929세포적세포독성.결론:인원항TNF-α특이성항체적획득,위진일보연제항TNF-α적특이성、고친화력기인공정항체전정료기출.핵당체전시기술위체외사선제비전인원항체제공료일충간편、유효적기술평태.
