中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2009年
2期
150-152
,共3页
尹荣兰%杨正涛%张艳晶%刘辉%杨琦%刘珊%张乃生
尹榮蘭%楊正濤%張豔晶%劉輝%楊琦%劉珊%張迺生
윤영란%양정도%장염정%류휘%양기%류산%장내생
金黄色葡萄球菌%ClfA基因%克隆%原核表达
金黃色葡萄毬菌%ClfA基因%剋隆%原覈錶達
금황색포도구균%ClfA기인%극륭%원핵표체
根据GenBank中ClfA基因序列设计特异性引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板,进行PCR扩增,获得了约2 300 bp的DNA片段.将PCR产物克隆至pMD18-T载体中,构建了克隆质粒pMD18-ClfA.用BamHⅠ和EcoR Ⅰ双酶切pMD18-ClfA和pET28a(+),将纯化的基因ClfA亚克隆至pET28a(+),构建重组质粒pET28a-ClfA,并将其转化至大肠杆菌感受态BL21(DE3)中,经1 mmol/L IPTG诱导和SDS-PAGE分析,在87 000处出现了与目的蛋白一致的外源蛋白带,Western-blotting分析表明,该蛋白具有金黄色葡萄球菌的抗原性.
根據GenBank中ClfA基因序列設計特異性引物,以金黃色葡萄毬菌基因組DNA為模闆,進行PCR擴增,穫得瞭約2 300 bp的DNA片段.將PCR產物剋隆至pMD18-T載體中,構建瞭剋隆質粒pMD18-ClfA.用BamHⅠ和EcoR Ⅰ雙酶切pMD18-ClfA和pET28a(+),將純化的基因ClfA亞剋隆至pET28a(+),構建重組質粒pET28a-ClfA,併將其轉化至大腸桿菌感受態BL21(DE3)中,經1 mmol/L IPTG誘導和SDS-PAGE分析,在87 000處齣現瞭與目的蛋白一緻的外源蛋白帶,Western-blotting分析錶明,該蛋白具有金黃色葡萄毬菌的抗原性.
근거GenBank중ClfA기인서렬설계특이성인물,이금황색포도구균기인조DNA위모판,진행PCR확증,획득료약2 300 bp적DNA편단.장PCR산물극륭지pMD18-T재체중,구건료극륭질립pMD18-ClfA.용BamHⅠ화EcoR Ⅰ쌍매절pMD18-ClfA화pET28a(+),장순화적기인ClfA아극륭지pET28a(+),구건중조질립pET28a-ClfA,병장기전화지대장간균감수태BL21(DE3)중,경1 mmol/L IPTG유도화SDS-PAGE분석,재87 000처출현료여목적단백일치적외원단백대,Western-blotting분석표명,해단백구유금황색포도구균적항원성.
