过程工程学报
過程工程學報
과정공정학보
The Chinese Journal of Process Engineering
2009年
5期
975-980
,共6页
马洪静%王平%苏志国%张松平
馬洪靜%王平%囌誌國%張鬆平
마홍정%왕평%소지국%장송평
8-(6-氨基己烷)-氨基-NADH%辅酶修饰%辅酶稳定性%辅酶活性
8-(6-氨基己烷)-氨基-NADH%輔酶脩飾%輔酶穩定性%輔酶活性
8-(6-안기기완)-안기-NADH%보매수식%보매은정성%보매활성
采用1,6-己二胺对烟酰胺辅酶(NADH)的腺嘌呤C8位点进行定点修饰,通过DEAE-Sepharose层析分离得到产物8-(6-氨基己烷)-氨基-NADH.经优化制备过程和分离条件,其收率可达60%.在pH 2.2～8.0内系统考察了修饰产物的pH稳定性,结果表明在不同种类的缓冲液中,修饰后辅酶的稳定性均有显著提高,在pH 6.5的柠檬酸盐和pH 8.0的磷酸盐缓冲液中,半衰期分别延长11和5倍.通过利用乳酸脱氢酶(LDH)和谷氨酸脱氢酶(GDH)测定修饰前后辅酶的活性,发现相同反应条件下修饰后辅酶的反应速率分别是天然NADH的3.0～3.8倍(LDH)和1.3～1.4倍(GDH).
採用1,6-己二胺對煙酰胺輔酶(NADH)的腺嘌呤C8位點進行定點脩飾,通過DEAE-Sepharose層析分離得到產物8-(6-氨基己烷)-氨基-NADH.經優化製備過程和分離條件,其收率可達60%.在pH 2.2～8.0內繫統攷察瞭脩飾產物的pH穩定性,結果錶明在不同種類的緩遲液中,脩飾後輔酶的穩定性均有顯著提高,在pH 6.5的檸檬痠鹽和pH 8.0的燐痠鹽緩遲液中,半衰期分彆延長11和5倍.通過利用乳痠脫氫酶(LDH)和穀氨痠脫氫酶(GDH)測定脩飾前後輔酶的活性,髮現相同反應條件下脩飾後輔酶的反應速率分彆是天然NADH的3.0～3.8倍(LDH)和1.3～1.4倍(GDH).
채용1,6-기이알대연선알보매(NADH)적선표령C8위점진행정점수식,통과DEAE-Sepharose층석분리득도산물8-(6-안기기완)-안기-NADH.경우화제비과정화분리조건,기수솔가체60%.재pH 2.2～8.0내계통고찰료수식산물적pH은정성,결과표명재불동충류적완충액중,수식후보매적은정성균유현저제고,재pH 6.5적저몽산염화pH 8.0적린산염완충액중,반쇠기분별연장11화5배.통과이용유산탈경매(LDH)화곡안산탈경매(GDH)측정수식전후보매적활성,발현상동반응조건하수식후보매적반응속솔분별시천연NADH적3.0～3.8배(LDH)화1.3～1.4배(GDH).
