遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2012年
5期
609-614
,共6页
周鲁明%刘殿辰%孙欢欢%赵博生
週魯明%劉殿辰%孫歡歡%趙博生
주로명%류전신%손환환%조박생
东亚三角涡虫%胰蛋白酶%蛋白表达%酶活
東亞三角渦蟲%胰蛋白酶%蛋白錶達%酶活
동아삼각와충%이단백매%단백표체%매활
通过对东亚三角涡虫胰蛋白酶Djtry 氨基酸序列比对分析,发现保守的催化三联体结构中第一位的His 被Lys 所取代.为了探究这种突变是否会对胰蛋白酶的活性有影响,文章构建了原核表达重组质粒pET-28a-Djtry,转化到E.coli BL21 中,利用IPTG 诱导表达,对表达的重组蛋白进行变性、复性、纯化以及Western blotting 鉴定,获得成分均一的活性蛋白.利用牛胰蛋白酶为标准品,胰蛋白酶特异性底物BAEE,检测Djtry 酶活力与比活力.SDS-PAGE 电泳表明诱导表达的融合蛋白为包涵体,分子量约为26 kDa,Western blotting 结果显示为目的蛋白,对复性纯化的目的蛋白进行酶活检测发现,突变型胰蛋白酶Djtry 仍然保持了胰蛋白酶催化性质,但是催化活性相对较弱.
通過對東亞三角渦蟲胰蛋白酶Djtry 氨基痠序列比對分析,髮現保守的催化三聯體結構中第一位的His 被Lys 所取代.為瞭探究這種突變是否會對胰蛋白酶的活性有影響,文章構建瞭原覈錶達重組質粒pET-28a-Djtry,轉化到E.coli BL21 中,利用IPTG 誘導錶達,對錶達的重組蛋白進行變性、複性、純化以及Western blotting 鑒定,穫得成分均一的活性蛋白.利用牛胰蛋白酶為標準品,胰蛋白酶特異性底物BAEE,檢測Djtry 酶活力與比活力.SDS-PAGE 電泳錶明誘導錶達的融閤蛋白為包涵體,分子量約為26 kDa,Western blotting 結果顯示為目的蛋白,對複性純化的目的蛋白進行酶活檢測髮現,突變型胰蛋白酶Djtry 仍然保持瞭胰蛋白酶催化性質,但是催化活性相對較弱.
통과대동아삼각와충이단백매Djtry 안기산서렬비대분석,발현보수적최화삼련체결구중제일위적His 피Lys 소취대.위료탐구저충돌변시부회대이단백매적활성유영향,문장구건료원핵표체중조질립pET-28a-Djtry,전화도E.coli BL21 중,이용IPTG 유도표체,대표체적중조단백진행변성、복성、순화이급Western blotting 감정,획득성분균일적활성단백.이용우이단백매위표준품,이단백매특이성저물BAEE,검측Djtry 매활력여비활력.SDS-PAGE 전영표명유도표체적융합단백위포함체,분자량약위26 kDa,Western blotting 결과현시위목적단백,대복성순화적목적단백진행매활검측발현,돌변형이단백매Djtry 잉연보지료이단백매최화성질,단시최화활성상대교약.
