CAJ | 학술논문

目的探讨OPCML基因在胃癌细胞株中的失表达及其与基因启动子CpG岛甲基化的关系,并分析OPCML对胃癌细胞增殖的影响.方法 (1)实验组为胃癌细胞株(SGC7901、AGS、MKN28、MKN45、N87、KATOⅢ和SNU1),对照组为正常胃组织,分别采用RT-PCR检测两组细胞OPCML mRNA的表达.(2)用亚硫酸盐修饰正常胃组织的DNA和胃癌细胞MKN45的DNA,分别采用甲基化特异性PCR法检测OPCML基因启动子区甲基化情况.(3)实验组为药物处理组,即5-氮胞苷(5-AZA)去甲基化处理胃癌细胞MKN45,对照组为未经药物处理的MKN45,分别采用RT-PCR检测OPCML mRNA的表达变化.(4)RT-PCR检测转染OPCML表达载体及pcDNA3.1空载体后mRNA的表达情况.(5)实验组为OPCML表达载体转染胃癌细胞AGS,对照组为空载体转染胃癌细胞AGS,使用浓度为0.5 mg/mL的新霉素(G418)对转染细胞进行筛选,观察OPCML对胃癌细胞AGS集落形成的影响.结果 (1)在胃癌细胞株中OPCML mRNA 的表达率显著低于正常胃组织.(2)胃癌细胞AGS和MKN45的甲基化程度明显高于正常胃组织.(3)5-AZA处理MKN45细胞后,OPCML表达上调.(4)OPCML表达载体转染HEK293A、AGS、MKN45细胞后,RT-PCR检测显示OPCML高表达.(5)外源性表达OPCML可抑制胃癌细胞AGS的集落形成率.结论 OPCML基因作为肿瘤抑制基因,在胃癌细胞中的表达下调.OPCML表达下调与该基因启动子区甲基化密切相关.药物性去甲基化处理能够恢复OPCML的表达.在表达沉默的AGS细胞中外源性表达OPCML,抑制集落形成率.
목적 탐토OPCML기인재위암세포주중적실표체급기여기인계동자CpG도갑기화적관계,병분석OPCML대위암세포증식적영향.방법 (1)실험조위위암세포주(SGC7901、AGS、MKN28、MKN45、N87、KATOⅢ화SNU1),대조조위정상위조직,분별채용RT-PCR검측량조세포OPCML mRNA적표체.(2)용아류산염수식정상위조직적DNA화위암세포MKN45적DNA,분별채용갑기화특이성PCR법검측OPCML기인계동자구갑기화정황.(3)실험조위약물처리조,즉5-담포감(5-AZA)거갑기화처리위암세포MKN45,대조조위미경약물처리적MKN45,분별채용RT-PCR검측OPCML mRNA적표체변화.(4)RT-PCR검측전염OPCML표체재체급pcDNA3.1공재체후mRNA적표체정황.(5)실험조위OPCML표체재체전염위암세포AGS,대조조위공재체전염위암세포AGS,사용농도위0.5 mg/mL적신매소(G418)대전염세포진행사선,관찰OPCML대위암세포AGS집락형성적영향.결과 (1)재위암세포주중OPCML mRNA 적표체솔현저저우정상위조직.(2)위암세포AGS화MKN45적갑기화정도명현고우정상위조직.(3)5-AZA처리MKN45세포후,OPCML표체상조.(4)OPCML표체재체전염HEK293A、AGS、MKN45세포후,RT-PCR검측현시OPCML고표체.(5)외원성표체OPCML가억제위암세포AGS적집락형성솔.결론 OPCML기인작위종류억제기인,재위암세포중적표체하조.OPCML표체하조여해기인계동자구갑기화밀절상관.약물성거갑기화처리능구회복OPCML적표체.재표체침묵적AGS세포중외원성표체OPCML,억제집락형성솔.