CAJ | 학술논문

本文以中国角蟾属4个种的蝌蚪酒精固定标本为材料,取尾部肌肉组织0.1g,滤纸吸干组织块表面的酒精,在研钵中用剪刀剪碎,液氮研磨成粉(必要时可加少量石英砂),转入1.5 ml离心管,加入1.0 ml提取缓冲液(0.5% SDS,10 mmol/L Tris-HCl, 100 mmol/L EDTA, pH 8.0),37℃温浴h,5000 r/min离心10min, 取上清转入另一1.5 ml离心管,氯仿/异戊醇(24:1)抽提两次,上清液加2倍体积预冷(-20 ℃)的无水乙醇沉淀DNA,12 000 r/min离心3min,无菌条件下风干后,50μl TE溶解,4 ℃保存备用.以通用引物PCR扩增12S rRNA和16S rRNA基因部分片段并测序.本文不采用蛋白酶K提取酒精保存标本的DNA模板,全部流程只需3个小时,可同时提取数十个乃至数百个标本,并且所提取的DNA模板适合短片段PCR扩增.
본문이중국각섬속4개충적과두주정고정표본위재료,취미부기육조직0.1g,려지흡간조직괴표면적주정,재연발중용전도전쇄,액담연마성분(필요시가가소량석영사),전입1.5 ml리심관,가입1.0 ml제취완충액(0.5% SDS,10 mmol/L Tris-HCl, 100 mmol/L EDTA, pH 8.0),37℃온욕h,5000 r/min리심10min, 취상청전입령일1.5 ml리심관,록방/이무순(24:1)추제량차,상청액가2배체적예랭(-20 ℃)적무수을순침정DNA,12 000 r/min리심3min,무균조건하풍간후,50μl TE용해,4 ℃보존비용.이통용인물PCR확증12S rRNA화16S rRNA기인부분편단병측서.본문불채용단백매K제취주정보존표본적DNA모판,전부류정지수3개소시,가동시제취수십개내지수백개표본,병차소제취적DNA모판괄합단편단PCR확증.