CAJ | 학술논문

目的表达和纯化人脂联素(adiponectin,APN)球状结构域并观察其生物学活性.方法用PCR方法复制人脂联素球状结构域(globular domain of adiponectin,gAPN)的cDNA,并克隆于pET28a(+)原核表达载体中.将重组表达质粒pET28a(+)-gAPN转化大肠埃希菌BL21(DE3),37℃培养至A600达到0.6时,加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白的表达.细菌经超声破菌,得到粗提的包涵体洗涤变性后经镍柱亲和层析柱一步纯化,获得纯化的gAPN重组蛋白,复性后冻干保存.然后,用链佐星(streptozocin,STZ)诱导的小鼠高血糖模型检测其生物活性.结果IPTG诱导后有Mr约为17 000大小的目的蛋白表达,免疫印迹结果进一步表明,其具有人gAPN的抗原性.表达蛋白主要以包涵体形式存在,占菌体蛋白的30%以上,表达产物经变性、纯化、复性,可获得纯度90%以上的目的蛋白.该重组蛋白能够降低STZ诱导的小鼠高血糖模型的血糖水平.结论在大肠埃希菌BL21(DE3)中成功表达了人gAPN蛋白,经变性、纯化、复性后得到具有生物学活性的蛋白.
목적표체화순화인지련소(adiponectin,APN)구상결구역병관찰기생물학활성.방법용PCR방법복제인지련소구상결구역(globular domain of adiponectin,gAPN)적cDNA,병극륭우pET28a(+)원핵표체재체중.장중조표체질립pET28a(+)-gAPN전화대장애희균BL21(DE3),37℃배양지A600체도0.6시,가입이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도목적단백적표체.세균경초성파균,득도조제적포함체세조변성후경얼주친화층석주일보순화,획득순화적gAPN중조단백,복성후동간보존.연후,용련좌성(streptozocin,STZ)유도적소서고혈당모형검측기생물활성.결과IPTG유도후유Mr약위17 000대소적목적단백표체,면역인적결과진일보표명,기구유인gAPN적항원성.표체단백주요이포함체형식존재,점균체단백적30%이상,표체산물경변성、순화、복성,가획득순도90%이상적목적단백.해중조단백능구강저STZ유도적소서고혈당모형적혈당수평.결론재대장애희균BL21(DE3)중성공표체료인gAPN단백,경변성、순화、복성후득도구유생물학활성적단백.