现代生物医学进展
現代生物醫學進展
현대생물의학진전
PROGRESS IN MODERN BIOMEDICINE
2006年
9期
27-30,封三
,共5页
刘畅%于玲范%刘宏宇%张庆芳%姜雪松%刘文华
劉暢%于玲範%劉宏宇%張慶芳%薑雪鬆%劉文華
류창%우령범%류굉우%장경방%강설송%류문화
骨髓间充质干细胞%细胞分化%5-氮杂胞苷%碱性成纤维细胞生长因子%心肌细胞
骨髓間充質榦細胞%細胞分化%5-氮雜胞苷%堿性成纖維細胞生長因子%心肌細胞
골수간충질간세포%세포분화%5-담잡포감%감성성섬유세포생장인자%심기세포
目的:研究体外不同诱导条件下大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌细胞分化的潜能.方法:取Wistar大鼠股骨和胫骨骨髓,分离培养MSCs,采用第二代或第三代MSCs,以5-氮杂胞苷(5-aza)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及两者联合作用,作为分化诱导剂,连续观察三周,相差显微镜下观察其形态变化.免疫细胞化学方法鉴定心肌特异性蛋白T(Troponin T, cTnT)、连接蛋白43(Connexin43)、α-横纹肌动蛋白(α-Sarcomeric Actin)的表达,应用半定量RT-PCR技术分析Nkx2.5、GATA-4、TGF-?等相关调控基因在分化过程中的表达.结果:免疫细胞化学显示cTnT、Connexin43、α-Sarcomeric Actin诱导前无表达,单纯bFGF诱导组及对照组未发现cTnT、Connexin43、α-Sarcomeric Actin染色阳性细胞,单纯5-aza诱导组诱导后上述三种蛋白阳性细胞表达比例分别为22%、28%、32%,5-aza与bFGF联合诱导组诱导后上述三者阳性细胞表达比例分别为28%、33%、40%,联合诱导组诱导后细胞阳性率明显高于单纯5-aza诱导组,两组相比较差异有显著性意义(P＜0.05).RT-PCR检测结果显示,GATA-4、Nkx2.5、TGF-β在诱导前的MSCs有低表达,单纯5-aza诱导组及5-aza与bFGF联合诱导组诱导后3周,这三种基因有较强的表达,单纯5-aza诱导组诱导检测结果显示,GATA-4、Nkx2.5、TGF-β在诱导前的MSCs有低表达,单纯5-aza诱导组及5-aza与bFGF联合诱导组诱导后3周,这三种基因有较强的表达,单纯5-aza诱导组诱导前后相比较,差异有显著性意义(P＜0.05),5-aza与bFGF联合诱导组诱导前后相比较,差异也有显著性意义(P＜0.05),单纯5-aza诱导组与5-aza和bFGF联合诱导组诱导后两组之间相比较,差异亦有显著性意义(P＜0.05),表明单纯5-aza诱导及5-aza与bFGF联合诱导均可使MSCs向心肌细胞转化,联合诱导可以使更多的MSCs向心肌细胞方向转化.单纯bFGF诱导组诱导前后无显著性差异.结论:5-aza及bFGF联合诱导,可以作为更好的促进MSCs向心肌细胞分化的条件.
目的:研究體外不同誘導條件下大鼠骨髓間充質榦細胞(MSCs)嚮心肌細胞分化的潛能.方法:取Wistar大鼠股骨和脛骨骨髓,分離培養MSCs,採用第二代或第三代MSCs,以5-氮雜胞苷(5-aza)、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)及兩者聯閤作用,作為分化誘導劑,連續觀察三週,相差顯微鏡下觀察其形態變化.免疫細胞化學方法鑒定心肌特異性蛋白T(Troponin T, cTnT)、連接蛋白43(Connexin43)、α-橫紋肌動蛋白(α-Sarcomeric Actin)的錶達,應用半定量RT-PCR技術分析Nkx2.5、GATA-4、TGF-?等相關調控基因在分化過程中的錶達.結果:免疫細胞化學顯示cTnT、Connexin43、α-Sarcomeric Actin誘導前無錶達,單純bFGF誘導組及對照組未髮現cTnT、Connexin43、α-Sarcomeric Actin染色暘性細胞,單純5-aza誘導組誘導後上述三種蛋白暘性細胞錶達比例分彆為22%、28%、32%,5-aza與bFGF聯閤誘導組誘導後上述三者暘性細胞錶達比例分彆為28%、33%、40%,聯閤誘導組誘導後細胞暘性率明顯高于單純5-aza誘導組,兩組相比較差異有顯著性意義(P＜0.05).RT-PCR檢測結果顯示,GATA-4、Nkx2.5、TGF-β在誘導前的MSCs有低錶達,單純5-aza誘導組及5-aza與bFGF聯閤誘導組誘導後3週,這三種基因有較彊的錶達,單純5-aza誘導組誘導檢測結果顯示,GATA-4、Nkx2.5、TGF-β在誘導前的MSCs有低錶達,單純5-aza誘導組及5-aza與bFGF聯閤誘導組誘導後3週,這三種基因有較彊的錶達,單純5-aza誘導組誘導前後相比較,差異有顯著性意義(P＜0.05),5-aza與bFGF聯閤誘導組誘導前後相比較,差異也有顯著性意義(P＜0.05),單純5-aza誘導組與5-aza和bFGF聯閤誘導組誘導後兩組之間相比較,差異亦有顯著性意義(P＜0.05),錶明單純5-aza誘導及5-aza與bFGF聯閤誘導均可使MSCs嚮心肌細胞轉化,聯閤誘導可以使更多的MSCs嚮心肌細胞方嚮轉化.單純bFGF誘導組誘導前後無顯著性差異.結論:5-aza及bFGF聯閤誘導,可以作為更好的促進MSCs嚮心肌細胞分化的條件.
목적:연구체외불동유도조건하대서골수간충질간세포(MSCs)향심기세포분화적잠능.방법:취Wistar대서고골화경골골수,분리배양MSCs,채용제이대혹제삼대MSCs,이5-담잡포감(5-aza)、감성성섬유세포생장인자(bFGF)급량자연합작용,작위분화유도제,련속관찰삼주,상차현미경하관찰기형태변화.면역세포화학방법감정심기특이성단백T(Troponin T, cTnT)、련접단백43(Connexin43)、α-횡문기동단백(α-Sarcomeric Actin)적표체,응용반정량RT-PCR기술분석Nkx2.5、GATA-4、TGF-?등상관조공기인재분화과정중적표체.결과:면역세포화학현시cTnT、Connexin43、α-Sarcomeric Actin유도전무표체,단순bFGF유도조급대조조미발현cTnT、Connexin43、α-Sarcomeric Actin염색양성세포,단순5-aza유도조유도후상술삼충단백양성세포표체비례분별위22%、28%、32%,5-aza여bFGF연합유도조유도후상술삼자양성세포표체비례분별위28%、33%、40%,연합유도조유도후세포양성솔명현고우단순5-aza유도조,량조상비교차이유현저성의의(P＜0.05).RT-PCR검측결과현시,GATA-4、Nkx2.5、TGF-β재유도전적MSCs유저표체,단순5-aza유도조급5-aza여bFGF연합유도조유도후3주,저삼충기인유교강적표체,단순5-aza유도조유도검측결과현시,GATA-4、Nkx2.5、TGF-β재유도전적MSCs유저표체,단순5-aza유도조급5-aza여bFGF연합유도조유도후3주,저삼충기인유교강적표체,단순5-aza유도조유도전후상비교,차이유현저성의의(P＜0.05),5-aza여bFGF연합유도조유도전후상비교,차이야유현저성의의(P＜0.05),단순5-aza유도조여5-aza화bFGF연합유도조유도후량조지간상비교,차이역유현저성의의(P＜0.05),표명단순5-aza유도급5-aza여bFGF연합유도균가사MSCs향심기세포전화,연합유도가이사경다적MSCs향심기세포방향전화.단순bFGF유도조유도전후무현저성차이.결론:5-aza급bFGF연합유도,가이작위경호적촉진MSCs향심기세포분화적조건.
