细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2008年
7期
663-667
,共5页
刘立鸿%许璐%李轶杰%张富春%马正海
劉立鴻%許璐%李軼傑%張富春%馬正海
류립홍%허로%리질걸%장부춘%마정해
密码子优化%HPV16衣壳基因%共表达真核载体%细胞转染
密碼子優化%HPV16衣殼基因%共錶達真覈載體%細胞轉染
밀마자우화%HPV16의각기인%공표체진핵재체%세포전염
目的:构建密码子优化的HPV16衣壳基因真核共表达载体pcDNA3.1-L1-IRES-L2.方法:用PCR技术从988载体中获得L1-IRES-L2片段,将该片段克隆到pCR -XL-TOPO 载体,然后定向亚克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中,从而构建真核共表达载体pcDNA3.1-L1-IRES-L2;通过水动力转染技术(hydrodynamics-based transfection)和脂质体细胞转染法(liposome-mediated transfection of cells),检测衣壳基因的体内、外转录情况;重组质粒转染后293T细胞后观察其形态变化,用Western blot方法检测293T细胞中L1衣壳蛋白的表达.结果:酶切和测序结果表明真核共表达载体pcD-NA3.1-L1-IRES-L2构建正确.重组质粒中的L1和L2基因在小鼠肝脏、293T细胞中均发生转录.重组质粒转染293T细胞后出现CPE(cytopathic effect)现象,表明衣壳基因在细胞中已表达.Western blot方法检测发现L1蛋白在293T细胞中表达.结论:成功地构建了pcDNA3.1-L1-IRES-L2共表达真核载体,为进一步研究HPV16感染机制奠定基础.
目的:構建密碼子優化的HPV16衣殼基因真覈共錶達載體pcDNA3.1-L1-IRES-L2.方法:用PCR技術從988載體中穫得L1-IRES-L2片段,將該片段剋隆到pCR -XL-TOPO 載體,然後定嚮亞剋隆到pcDNA3.1(+)真覈錶達載體中,從而構建真覈共錶達載體pcDNA3.1-L1-IRES-L2;通過水動力轉染技術(hydrodynamics-based transfection)和脂質體細胞轉染法(liposome-mediated transfection of cells),檢測衣殼基因的體內、外轉錄情況;重組質粒轉染後293T細胞後觀察其形態變化,用Western blot方法檢測293T細胞中L1衣殼蛋白的錶達.結果:酶切和測序結果錶明真覈共錶達載體pcD-NA3.1-L1-IRES-L2構建正確.重組質粒中的L1和L2基因在小鼠肝髒、293T細胞中均髮生轉錄.重組質粒轉染293T細胞後齣現CPE(cytopathic effect)現象,錶明衣殼基因在細胞中已錶達.Western blot方法檢測髮現L1蛋白在293T細胞中錶達.結論:成功地構建瞭pcDNA3.1-L1-IRES-L2共錶達真覈載體,為進一步研究HPV16感染機製奠定基礎.
목적:구건밀마자우화적HPV16의각기인진핵공표체재체pcDNA3.1-L1-IRES-L2.방법:용PCR기술종988재체중획득L1-IRES-L2편단,장해편단극륭도pCR -XL-TOPO 재체,연후정향아극륭도pcDNA3.1(+)진핵표체재체중,종이구건진핵공표체재체pcDNA3.1-L1-IRES-L2;통과수동력전염기술(hydrodynamics-based transfection)화지질체세포전염법(liposome-mediated transfection of cells),검측의각기인적체내、외전록정황;중조질립전염후293T세포후관찰기형태변화,용Western blot방법검측293T세포중L1의각단백적표체.결과:매절화측서결과표명진핵공표체재체pcD-NA3.1-L1-IRES-L2구건정학.중조질립중적L1화L2기인재소서간장、293T세포중균발생전록.중조질립전염293T세포후출현CPE(cytopathic effect)현상,표명의각기인재세포중이표체.Western blot방법검측발현L1단백재293T세포중표체.결론:성공지구건료pcDNA3.1-L1-IRES-L2공표체진핵재체,위진일보연구HPV16감염궤제전정기출.
