CAJ | 학술논문

背景:现有的人工瓣膜,无论是机械瓣膜还是物瓣膜,都存在与取材有关、无法从工艺制作方式改进解决的固有缺陷.组织工程心脏瓣膜概念的提出为解决该难题提供了新的方向.目的:通过比较成熟分化血管内皮细胞和骨髓间充质干细胞骨的获取手段、体外增殖能力以及在脱细胞基质上的生长情况,分析何者更适合作为制备组织工程人工心脏瓣膜的种植细胞.设计、时间及地点:单一样本观察,于2008 06/09在上海市胸科医院动物实验基地完成.材事斗:用胰蛋白酶(胰酶)EDTA、Triton X-100、DNase、RNase消化猪主动脉瓣膜获得脱细胞基质.从1只12 kg 2岁雄性杂交犬大隐静脉、股外侧动脉及肋骨骨髓获取种植细胞.方法:用胰酶消化并收集内皮细胞,收集骨髓细胞,分别进行培养.通过贴壁法获得内皮细胞及骨髓间充质干细胞.利用内皮细胞生长因子诱导骨髓间尤质干细胞向内皮细胞分化,并绘制细胞生长曲线.以抗Ⅷ因子抗体以及抗血管内皮生长因子抗体荧光染色,荧光显微镜观察.将细胞种植于脱细胞瓣膜上培养3 d后进行扫捕电镜观察.主要观察指标:①试验犬伤口愈合情况.②细胞培养、增殖情况.③骨髓来源骨髓间充质干细胞表型分析以及形态学观察.结果:成熟血管内皮细胞体外增殖能力低下,骨髓间充质干细胞则增殖旺盛,生长曲线显示骨髓间充质干细胞的倍增时间约30 h,而成熟内皮细胞生长曲线平直.对骨髓间充质干细胞进行抗Ⅷ因子抗体以及抗VEGF抗体荧光染色.可见荧光染色阳性.扫描电镜见种植骨髓间充质干细胞的脱细胞瓣膜上散在星状细胞贴附.结论:骨髓间充质下细胞体外增殖能力强,在内皮细胞生长因子诱导下可向内皮细胞转化,并可以生长贴附于脱细胞瓣膜,是作为组织上程人工心脏瓣膜制备的理想细胞来源.
배경:현유적인공판막,무론시궤계판막환시물판막,도존재여취재유관、무법종공예제작방식개진해결적고유결함.조직공정심장판막개념적제출위해결해난제제공료신적방향.목적:통과비교성숙분화혈관내피세포화골수간충질간세포골적획취수단、체외증식능력이급재탈세포기질상적생장정황,분석하자경괄합작위제비조직공정인공심장판막적충식세포.설계、시간급지점:단일양본관찰,우2008 06/09재상해시흉과의원동물실험기지완성.재사두:용이단백매(이매)EDTA、Triton X-100、DNase、RNase소화저주동맥판막획득탈세포기질.종1지12 kg 2세웅성잡교견대은정맥、고외측동맥급륵골골수획취충식세포.방법:용이매소화병수집내피세포,수집골수세포,분별진행배양.통과첩벽법획득내피세포급골수간충질간세포.이용내피세포생장인자유도골수간우질간세포향내피세포분화,병회제세포생장곡선.이항Ⅷ인자항체이급항혈관내피생장인자항체형광염색,형광현미경관찰.장세포충식우탈세포판막상배양3 d후진행소포전경관찰.주요관찰지표:①시험견상구유합정황.②세포배양、증식정황.③골수래원골수간충질간세포표형분석이급형태학관찰.결과:성숙혈관내피세포체외증식능력저하,골수간충질간세포칙증식왕성,생장곡선현시골수간충질간세포적배증시간약30 h,이성숙내피세포생장곡선평직.대골수간충질간세포진행항Ⅷ인자항체이급항VEGF항체형광염색.가견형광염색양성.소묘전경견충식골수간충질간세포적탈세포판막상산재성상세포첩부.결론:골수간충질하세포체외증식능력강,재내피세포생장인자유도하가향내피세포전화,병가이생장첩부우탈세포판막,시작위조직상정인공심장판막제비적이상세포래원.