中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2009年
8期
699-703
,共5页
范宝峰%刘晓梅%甘宜敏%史震%汤仁仙%郑葵阳
範寶峰%劉曉梅%甘宜敏%史震%湯仁仙%鄭葵暘
범보봉%류효매%감의민%사진%탕인선%정규양
HBX%RNA干扰%凋亡%HepG2
HBX%RNA榦擾%凋亡%HepG2
HBX%RNA간우%조망%HepG2
目的:构建靶向乙肝病毒X基因(HBX)的shRNA表达载体pSilencer3.1-shHBX,并应用其体外抑制HBX促HepG2细胞凋亡的作用.方法:设计并构建靶向HBX的shRNA表达载体pSilencer3.1-shHBX,脂质体转染法将HBX表达载体pcDNA3.1-HBX与pSilencer3.1-shHBX共转染人肝癌HepG2细胞,培养72小时后,分别以RT-PCR、Western blot和免疫荧光检测HBX的表达量.Annexin V-FITC/PI双染经流式细胞仪检测细胞的凋亡变化.结果:重组质粒pSilencer3.1-shHBX酶切鉴定和测序结果均与设计的一致.该质粒使HBX基因mRNA表达量降低了47.1%,进而使HBx蛋白表达量降低了58.9%,HBx蛋白荧光强度减弱,并使HBX 诱导的HepG2细胞凋亡率降低了52.11%.而阴性对照质粒无此作用.结论:成功构建靶向HBX shRNA表达载体pSilencer3.1-shHBX,并可应用其抑制HBX促HepG2细胞凋亡的作用.
目的:構建靶嚮乙肝病毒X基因(HBX)的shRNA錶達載體pSilencer3.1-shHBX,併應用其體外抑製HBX促HepG2細胞凋亡的作用.方法:設計併構建靶嚮HBX的shRNA錶達載體pSilencer3.1-shHBX,脂質體轉染法將HBX錶達載體pcDNA3.1-HBX與pSilencer3.1-shHBX共轉染人肝癌HepG2細胞,培養72小時後,分彆以RT-PCR、Western blot和免疫熒光檢測HBX的錶達量.Annexin V-FITC/PI雙染經流式細胞儀檢測細胞的凋亡變化.結果:重組質粒pSilencer3.1-shHBX酶切鑒定和測序結果均與設計的一緻.該質粒使HBX基因mRNA錶達量降低瞭47.1%,進而使HBx蛋白錶達量降低瞭58.9%,HBx蛋白熒光彊度減弱,併使HBX 誘導的HepG2細胞凋亡率降低瞭52.11%.而陰性對照質粒無此作用.結論:成功構建靶嚮HBX shRNA錶達載體pSilencer3.1-shHBX,併可應用其抑製HBX促HepG2細胞凋亡的作用.
목적:구건파향을간병독X기인(HBX)적shRNA표체재체pSilencer3.1-shHBX,병응용기체외억제HBX촉HepG2세포조망적작용.방법:설계병구건파향HBX적shRNA표체재체pSilencer3.1-shHBX,지질체전염법장HBX표체재체pcDNA3.1-HBX여pSilencer3.1-shHBX공전염인간암HepG2세포,배양72소시후,분별이RT-PCR、Western blot화면역형광검측HBX적표체량.Annexin V-FITC/PI쌍염경류식세포의검측세포적조망변화.결과:중조질립pSilencer3.1-shHBX매절감정화측서결과균여설계적일치.해질립사HBX기인mRNA표체량강저료47.1%,진이사HBx단백표체량강저료58.9%,HBx단백형광강도감약,병사HBX 유도적HepG2세포조망솔강저료52.11%.이음성대조질립무차작용.결론:성공구건파향HBX shRNA표체재체pSilencer3.1-shHBX,병가응용기억제HBX촉HepG2세포조망적작용.
