南华大学学报（医学版）
南華大學學報（醫學版）
남화대학학보（의학판）
JOURNAL OF NANHUA UNIVERSITY(MEDICAL EDITION)
2009年
3期
257-260
,共4页
龙跃生%孙卫文%赵绮华%曾涛%廖卫平
龍躍生%孫衛文%趙綺華%曾濤%廖衛平
룡약생%손위문%조기화%증도%료위평
RNA干扰%钠通道%癫痫
RNA榦擾%鈉通道%癲癇
RNA간우%납통도%전간
目的 采用人SCN1A基因非保守区DNA构建短发夹RNA(shRNA)稳定表达的重组质粒,在HEK293细胞中抑制SCN1A基因表达.方法 PCR分别正反向扩增SCN1A基因特异序列,构建成一个绿色光蛋白(GFP)与发夹结构RNA(shRNA)融合表达的重组质粒pEGFP-SCN1A-shRNA;该质粒和对照质粒(pCMV-EGFP)分别与SCN1A基因表达质粒(pCMV-SCN1A)共转染HEK293细胞株,采用半定量RT-PCR及双荧光共定位法鉴定SCN1A基因的表达情况.结果 与对照相比较,shRNA表达质粒转染的培养细胞中SCN1A基因mRNA表达量下调90%;双荧光共定位显示实验组阳性细胞中只检测到GFP蛋白,未能检测到Nav1.1,而对照组阳性细胞中能同时检测到GFP蛋白和Nav1.1.结论 shRNA表达质粒在培养细胞中能有效地抑制SCN1A基因的表达.该质粒可进一步改造成腺病毒表达载体,在动物脑组织中进行永久性表达,建立癫痫等神经系统疾病的动物模型,可望成为致病机理研究和开发新治疗途径的工具.
目的 採用人SCN1A基因非保守區DNA構建短髮夾RNA(shRNA)穩定錶達的重組質粒,在HEK293細胞中抑製SCN1A基因錶達.方法 PCR分彆正反嚮擴增SCN1A基因特異序列,構建成一箇綠色光蛋白(GFP)與髮夾結構RNA(shRNA)融閤錶達的重組質粒pEGFP-SCN1A-shRNA;該質粒和對照質粒(pCMV-EGFP)分彆與SCN1A基因錶達質粒(pCMV-SCN1A)共轉染HEK293細胞株,採用半定量RT-PCR及雙熒光共定位法鑒定SCN1A基因的錶達情況.結果 與對照相比較,shRNA錶達質粒轉染的培養細胞中SCN1A基因mRNA錶達量下調90%;雙熒光共定位顯示實驗組暘性細胞中隻檢測到GFP蛋白,未能檢測到Nav1.1,而對照組暘性細胞中能同時檢測到GFP蛋白和Nav1.1.結論 shRNA錶達質粒在培養細胞中能有效地抑製SCN1A基因的錶達.該質粒可進一步改造成腺病毒錶達載體,在動物腦組織中進行永久性錶達,建立癲癇等神經繫統疾病的動物模型,可望成為緻病機理研究和開髮新治療途徑的工具.
목적 채용인SCN1A기인비보수구DNA구건단발협RNA(shRNA)은정표체적중조질립,재HEK293세포중억제SCN1A기인표체.방법 PCR분별정반향확증SCN1A기인특이서렬,구건성일개록색광단백(GFP)여발협결구RNA(shRNA)융합표체적중조질립pEGFP-SCN1A-shRNA;해질립화대조질립(pCMV-EGFP)분별여SCN1A기인표체질립(pCMV-SCN1A)공전염HEK293세포주,채용반정량RT-PCR급쌍형광공정위법감정SCN1A기인적표체정황.결과 여대조상비교,shRNA표체질립전염적배양세포중SCN1A기인mRNA표체량하조90%;쌍형광공정위현시실험조양성세포중지검측도GFP단백,미능검측도Nav1.1,이대조조양성세포중능동시검측도GFP단백화Nav1.1.결론 shRNA표체질립재배양세포중능유효지억제SCN1A기인적표체.해질립가진일보개조성선병독표체재체,재동물뇌조직중진행영구성표체,건립전간등신경계통질병적동물모형,가망성위치병궤리연구화개발신치료도경적공구.
