昆明医学院学报
昆明醫學院學報
곤명의학원학보
ACADEMIC JOURNAL OF KUNMING MEDICAL COLLEGE
2010年
11期
37-40
,共4页
胡明宇%王剑松%柯昌兴%韦海荣%赵献%张启波
鬍明宇%王劍鬆%柯昌興%韋海榮%趙獻%張啟波
호명우%왕검송%가창흥%위해영%조헌%장계파
Kringle5%蛋白纯化%膀胱肿瘤
Kringle5%蛋白純化%膀胱腫瘤
Kringle5%단백순화%방광종류
目的 获得高纯度并且有活性的K5蛋白.方法 继构建了重组质粒pGEX-5X-1-K5的基础上,转化感受态细胞BL-21、DH-5α、Top10,并优化了表达条件,经过裂解、洗涤、溶解包涵体后,用带GST标签的谷胱甘肽琼脂糖4B亲和柱进行纯化,Bradford法测蛋白浓度,分别用ECV304细胞和裸鼠皮下移植瘤模型对蛋白进行了活性测定.结果 获得了表达量最高的条件:BL21感受态细胞,诱导时间:6 h,纯化后的K5蛋白纯度达到95%以上,K5浓度为5 μg/mL时抑制率最高.裸鼠模型上,K5组肿瘤的生长速度明显慢于PBS对照.结论 含有GST的融合蛋白表达载体,表达量多、易于纯化、成本低、蛋白纯度高,并能有效的抑制ECV304细胞,抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,为K5的工业化大规模生产奠定了基础.
目的 穫得高純度併且有活性的K5蛋白.方法 繼構建瞭重組質粒pGEX-5X-1-K5的基礎上,轉化感受態細胞BL-21、DH-5α、Top10,併優化瞭錶達條件,經過裂解、洗滌、溶解包涵體後,用帶GST標籤的穀胱甘肽瓊脂糖4B親和柱進行純化,Bradford法測蛋白濃度,分彆用ECV304細胞和裸鼠皮下移植瘤模型對蛋白進行瞭活性測定.結果 穫得瞭錶達量最高的條件:BL21感受態細胞,誘導時間:6 h,純化後的K5蛋白純度達到95%以上,K5濃度為5 μg/mL時抑製率最高.裸鼠模型上,K5組腫瘤的生長速度明顯慢于PBS對照.結論 含有GST的融閤蛋白錶達載體,錶達量多、易于純化、成本低、蛋白純度高,併能有效的抑製ECV304細胞,抑製裸鼠皮下移植瘤的生長,為K5的工業化大規模生產奠定瞭基礎.
목적 획득고순도병차유활성적K5단백.방법 계구건료중조질립pGEX-5X-1-K5적기출상,전화감수태세포BL-21、DH-5α、Top10,병우화료표체조건,경과렬해、세조、용해포함체후,용대GST표첨적곡광감태경지당4B친화주진행순화,Bradford법측단백농도,분별용ECV304세포화라서피하이식류모형대단백진행료활성측정.결과 획득료표체량최고적조건:BL21감수태세포,유도시간:6 h,순화후적K5단백순도체도95%이상,K5농도위5 μg/mL시억제솔최고.라서모형상,K5조종류적생장속도명현만우PBS대조.결론 함유GST적융합단백표체재체,표체량다、역우순화、성본저、단백순도고,병능유효적억제ECV304세포,억제라서피하이식류적생장,위K5적공업화대규모생산전정료기출.
