徐州医学院学报
徐州醫學院學報
서주의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE XUZHOU
2011年
2期
81-83
,共3页
真核表达载体%Tet-on%转染
真覈錶達載體%Tet-on%轉染
진핵표체재체%Tet-on%전염
目的 依据Tet-on系统的原理,构建2个真核表达载体pTRE-Cre-EGFP(P1)和Pcmv-rtTA-EGFP-Cre-Phcmv(P2)并转染293T细胞,通过观察报告基因EGFP表达的绿色荧光,检验载体中基因元件能否正常发挥作用.方法 从pCre-IRES-EGFP载体上切下Cre-EGFP,与pTRE载体连接成P1载体,切下P1的部分片段Phcmv-Cre-EGFP 与pTet-On载体的部分片段Pcmv-rtTA连接成 P2载体,利用脂质体将pTet-on和P1共转染、将P2单转染入293T细胞,加入或者不加强力霉素(Doxcycline,Dox)诱导,观察绿色荧光.结果 成功构建载体P1及P2;P1和pTet-on质粒的共转染及P2的单转染在Dox诱导下均有绿色荧光的表达,无Dox诱导时绿色荧光表达水平极低.结论 构建的载体P1及P2中的基因元件在体外均能正常发挥作用,为进一步制备诱导性表达Cre的转基因小鼠奠定了基础.
目的 依據Tet-on繫統的原理,構建2箇真覈錶達載體pTRE-Cre-EGFP(P1)和Pcmv-rtTA-EGFP-Cre-Phcmv(P2)併轉染293T細胞,通過觀察報告基因EGFP錶達的綠色熒光,檢驗載體中基因元件能否正常髮揮作用.方法 從pCre-IRES-EGFP載體上切下Cre-EGFP,與pTRE載體連接成P1載體,切下P1的部分片段Phcmv-Cre-EGFP 與pTet-On載體的部分片段Pcmv-rtTA連接成 P2載體,利用脂質體將pTet-on和P1共轉染、將P2單轉染入293T細胞,加入或者不加彊力黴素(Doxcycline,Dox)誘導,觀察綠色熒光.結果 成功構建載體P1及P2;P1和pTet-on質粒的共轉染及P2的單轉染在Dox誘導下均有綠色熒光的錶達,無Dox誘導時綠色熒光錶達水平極低.結論 構建的載體P1及P2中的基因元件在體外均能正常髮揮作用,為進一步製備誘導性錶達Cre的轉基因小鼠奠定瞭基礎.
목적 의거Tet-on계통적원리,구건2개진핵표체재체pTRE-Cre-EGFP(P1)화Pcmv-rtTA-EGFP-Cre-Phcmv(P2)병전염293T세포,통과관찰보고기인EGFP표체적록색형광,검험재체중기인원건능부정상발휘작용.방법 종pCre-IRES-EGFP재체상절하Cre-EGFP,여pTRE재체련접성P1재체,절하P1적부분편단Phcmv-Cre-EGFP 여pTet-On재체적부분편단Pcmv-rtTA련접성 P2재체,이용지질체장pTet-on화P1공전염、장P2단전염입293T세포,가입혹자불가강력매소(Doxcycline,Dox)유도,관찰록색형광.결과 성공구건재체P1급P2;P1화pTet-on질립적공전염급P2적단전염재Dox유도하균유록색형광적표체,무Dox유도시록색형광표체수평겁저.결론 구건적재체P1급P2중적기인원건재체외균능정상발휘작용,위진일보제비유도성표체Cre적전기인소서전정료기출.
