暨南大学学报（自然科学与医学版）
暨南大學學報（自然科學與醫學版）
기남대학학보（자연과학여의학판）
JOURNAL OF JINAN UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE & MEDICINE EDITION）
2011年
5期
498-503,512
,共7页
管明斌%王艳凤%谢春芳%姚冬生
管明斌%王豔鳳%謝春芳%姚鼕生
관명빈%왕염봉%사춘방%요동생
羧甲基纤维素钠%内切葡聚糖酶%纯化%Amylomyces. rouxii HN0512
羧甲基纖維素鈉%內切葡聚糖酶%純化%Amylomyces. rouxii HN0512
최갑기섬유소납%내절포취당매%순화%Amylomyces. rouxii HN0512
Amylomyces.rouxii HN0512经羧甲基纤维素钠(CMC-Na)诱导,可产内切葡聚糖酶,通过正交试验优化诱导培养基,结果在培养基为1％羧甲基纤维素钠、2％麸皮汁、0.2％蛋白胨(以上均为质量分数)时可以诱导出较高活性的酶,用HiTrap QFF阴离子交换层析从培养液上清中纯化得到了具有内切葡聚糖酶活性的P3组分,活性组份的SDS-PAGE分析电泳呈现一条带,经AlphaEaseFCTM软件预测P3的分子质量为18.7 ku；酶反应的最适温度和pH分别为60℃和5.0,在pH 4.0 -7.0范围内稳定性最好,在70℃还能保持50％以上的酶活力；金属离子Fe3+、Ba2+、Fe2和表面活性剂尿素对酶起到了激活作用；反应动力学参数Km和Vmax分别为11.68 mg· mL-1、0.56 μmol·L-1·min-1.本研究获得了一株产内切葡聚糖酶新菌种,并为进一步用基因工程方法克隆并构建重组内切葡聚糖酶基因工程菌奠定了重要的基础.
Amylomyces.rouxii HN0512經羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)誘導,可產內切葡聚糖酶,通過正交試驗優化誘導培養基,結果在培養基為1％羧甲基纖維素鈉、2％麩皮汁、0.2％蛋白胨(以上均為質量分數)時可以誘導齣較高活性的酶,用HiTrap QFF陰離子交換層析從培養液上清中純化得到瞭具有內切葡聚糖酶活性的P3組分,活性組份的SDS-PAGE分析電泳呈現一條帶,經AlphaEaseFCTM軟件預測P3的分子質量為18.7 ku；酶反應的最適溫度和pH分彆為60℃和5.0,在pH 4.0 -7.0範圍內穩定性最好,在70℃還能保持50％以上的酶活力；金屬離子Fe3+、Ba2+、Fe2和錶麵活性劑尿素對酶起到瞭激活作用；反應動力學參數Km和Vmax分彆為11.68 mg· mL-1、0.56 μmol·L-1·min-1.本研究穫得瞭一株產內切葡聚糖酶新菌種,併為進一步用基因工程方法剋隆併構建重組內切葡聚糖酶基因工程菌奠定瞭重要的基礎.
Amylomyces.rouxii HN0512경최갑기섬유소납(CMC-Na)유도,가산내절포취당매,통과정교시험우화유도배양기,결과재배양기위1％최갑기섬유소납、2％부피즙、0.2％단백동(이상균위질량분수)시가이유도출교고활성적매,용HiTrap QFF음리자교환층석종배양액상청중순화득도료구유내절포취당매활성적P3조분,활성조빈적SDS-PAGE분석전영정현일조대,경AlphaEaseFCTM연건예측P3적분자질량위18.7 ku；매반응적최괄온도화pH분별위60℃화5.0,재pH 4.0 -7.0범위내은정성최호,재70℃환능보지50％이상적매활력；금속리자Fe3+、Ba2+、Fe2화표면활성제뇨소대매기도료격활작용；반응동역학삼수Km화Vmax분별위11.68 mg· mL-1、0.56 μmol·L-1·min-1.본연구획득료일주산내절포취당매신균충,병위진일보용기인공정방법극륭병구건중조내절포취당매기인공정균전정료중요적기출.
