中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2012年
4期
344-346,350
,共4页
蒋玉萌%赵雪%王宁%王洪才%张惊宇%杨子超
蔣玉萌%趙雪%王寧%王洪纔%張驚宇%楊子超
장옥맹%조설%왕저%왕홍재%장량우%양자초
UBE3a基因%天使综合征%体外神经元培养%基因表达与定位
UBE3a基因%天使綜閤徵%體外神經元培養%基因錶達與定位
UBE3a기인%천사종합정%체외신경원배양%기인표체여정위
目的:调取并构建含有人UBE3a基因全长cDNA的真核表达载体pEGFP-UBE3a,采用磷酸钙转染方法将构建的重组质粒在神经元细胞中表达并观察EGFP-UBE3a蛋白的亚细胞定位.方法:采用PCR技术从人胎脑组织cDNA文库中扩增UBE3a基因的ORF片段并进行酶切构建pEGFP-UBE3a的真核表达重组质粒.用磷酸钙转染方法将重组质粒转染入体外培养的神经元细胞,分别在体外培养8天和14天时通过倒置荧光显微镜观察重组蛋白的表达和定位情况.结果:PCR扩增获得人胎脑组织cDNA文库中UBE3a cDNA全长2559 bp,构建真核表达重组质粒pEGFP-UBE3a成功,经DNA测序与GenBank中的人UBE3a cDNA序列一致.经倒置荧光显微镜观察重组质粒的表达情况,结果显示转染重组质粒的细胞中有高水平的EGFP-UBE3a蛋白表达,且UBE3a在早期神经元的细胞质和细胞核中广泛表达,并弥散在轴突和树突,而在成熟神经元细胞核中的表达明显富集.结论:本实验成功构建了pEGFP-UBE3a真核表达质粒,EGFP-UBE3a蛋白在体外培养的神经元细胞中能够有效表达,且随着神经元的成熟逐步向核内富集,为进一步研究UBE3a基因在天使综合征发生发展中的作用奠定了基础.
目的:調取併構建含有人UBE3a基因全長cDNA的真覈錶達載體pEGFP-UBE3a,採用燐痠鈣轉染方法將構建的重組質粒在神經元細胞中錶達併觀察EGFP-UBE3a蛋白的亞細胞定位.方法:採用PCR技術從人胎腦組織cDNA文庫中擴增UBE3a基因的ORF片段併進行酶切構建pEGFP-UBE3a的真覈錶達重組質粒.用燐痠鈣轉染方法將重組質粒轉染入體外培養的神經元細胞,分彆在體外培養8天和14天時通過倒置熒光顯微鏡觀察重組蛋白的錶達和定位情況.結果:PCR擴增穫得人胎腦組織cDNA文庫中UBE3a cDNA全長2559 bp,構建真覈錶達重組質粒pEGFP-UBE3a成功,經DNA測序與GenBank中的人UBE3a cDNA序列一緻.經倒置熒光顯微鏡觀察重組質粒的錶達情況,結果顯示轉染重組質粒的細胞中有高水平的EGFP-UBE3a蛋白錶達,且UBE3a在早期神經元的細胞質和細胞覈中廣汎錶達,併瀰散在軸突和樹突,而在成熟神經元細胞覈中的錶達明顯富集.結論:本實驗成功構建瞭pEGFP-UBE3a真覈錶達質粒,EGFP-UBE3a蛋白在體外培養的神經元細胞中能夠有效錶達,且隨著神經元的成熟逐步嚮覈內富集,為進一步研究UBE3a基因在天使綜閤徵髮生髮展中的作用奠定瞭基礎.
목적:조취병구건함유인UBE3a기인전장cDNA적진핵표체재체pEGFP-UBE3a,채용린산개전염방법장구건적중조질립재신경원세포중표체병관찰EGFP-UBE3a단백적아세포정위.방법:채용PCR기술종인태뇌조직cDNA문고중확증UBE3a기인적ORF편단병진행매절구건pEGFP-UBE3a적진핵표체중조질립.용린산개전염방법장중조질립전염입체외배양적신경원세포,분별재체외배양8천화14천시통과도치형광현미경관찰중조단백적표체화정위정황.결과:PCR확증획득인태뇌조직cDNA문고중UBE3a cDNA전장2559 bp,구건진핵표체중조질립pEGFP-UBE3a성공,경DNA측서여GenBank중적인UBE3a cDNA서렬일치.경도치형광현미경관찰중조질립적표체정황,결과현시전염중조질립적세포중유고수평적EGFP-UBE3a단백표체,차UBE3a재조기신경원적세포질화세포핵중엄범표체,병미산재축돌화수돌,이재성숙신경원세포핵중적표체명현부집.결론:본실험성공구건료pEGFP-UBE3a진핵표체질립,EGFP-UBE3a단백재체외배양적신경원세포중능구유효표체,차수착신경원적성숙축보향핵내부집,위진일보연구UBE3a기인재천사종합정발생발전중적작용전정료기출.
