CAJ | 학술논문

目的应用重组人骨形态发生蛋白4基因腺相关病毒载体(AAV-hBMP4)转染兔骨髓基质干细胞(BMSCs),观察其对BMSCs生物学行为的影响,从而为骨组织工程寻找理想的病毒载体及种子细胞.方法全骨髓法培养兔BMSCs,按感染复数(MOI)值不同设定为四组,分别转染兔BMSCs,观察病毒量对细胞形态的影响.选取影响最小的MOI值,进行后续实验.转染兔BMSCs,MTT法描记细胞生长曲线,观察AAV对细胞增殖活性的影响.以重组增强型绿色荧光蛋白基因的腺相关病毒载体(AAV-EGFP)为参照,行流式细胞仪检测,计算转染效率.AAV-hBMP4与对照病毒AAV-EGFP分别转染细胞,观察细胞形态,行碱性磷酸酶(ALP)染色、Von Kossa染色及ALP含量测定,观察成骨活性.兔肌袋实验观察异位成骨情况.结果 MOI值为5×107 vg/cell时,AAV对细胞形态影响最小,以此值进行后续实验.AAV转染后,细胞增殖活性良好,转染效率为55%～65%.AAV-hBMP4转染后,细胞形态呈现典型的成骨改变,ALP染色及VonKossa染色均出现成骨的特征性改变,而AAV-EGFP组无上述改变.细胞上清ALP含量测定显示,实验组ALP含量显著增高,与对照组比较差异有统计学意义(t=218.65,P＜0.01).兔肌袋实验术后4周组织学检测可见大量钙盐沉积,矿化结节形成.结论 AAV-hBMP4转染效率高,对BMSCs的增殖活性影响小,AAV-hBMP4转染的BMSCs可望成为组织工程化骨的理想种子细胞.
목적 응용중조인골형태발생단백4기인선상관병독재체(AAV-hBMP4)전염토골수기질간세포(BMSCs),관찰기대BMSCs생물학행위적영향,종이위골조직공정심조이상적병독재체급충자세포.방법 전골수법배양토BMSCs,안감염복수(MOI)치불동설정위사조,분별전염토BMSCs,관찰병독량대세포형태적영향.선취영향최소적MOI치,진행후속실험.전염토BMSCs,MTT법묘기세포생장곡선,관찰AAV대세포증식활성적영향.이중조증강형록색형광단백기인적선상관병독재체(AAV-EGFP)위삼조,행류식세포의검측,계산전염효솔.AAV-hBMP4여대조병독AAV-EGFP분별전염세포,관찰세포형태,행감성린산매(ALP)염색、Von Kossa염색급ALP함량측정,관찰성골활성.토기대실험관찰이위성골정황.결과 MOI치위5×107 vg/cell시,AAV대세포형태영향최소,이차치진행후속실험.AAV전염후,세포증식활성량호,전염효솔위55%～65%.AAV-hBMP4전염후,세포형태정현전형적성골개변,ALP염색급VonKossa염색균출현성골적특정성개변,이AAV-EGFP조무상술개변.세포상청ALP함량측정현시,실험조ALP함량현저증고,여대조조비교차이유통계학의의(t=218.65,P＜0.01).토기대실험술후4주조직학검측가견대량개염침적,광화결절형성.결론 AAV-hBMP4전염효솔고,대BMSCs적증식활성영향소,AAV-hBMP4전염적BMSCs가망성위조직공정화골적이상충자세포.