氨基酸和生物资源
氨基痠和生物資源
안기산화생물자원
AMINO ACIDS AND BIOTIC RESOURCES
2005年
1期
56-59,69
,共5页
冯爱娟%杨太成%刘耘%冼江
馮愛娟%楊太成%劉耘%冼江
풍애연%양태성%류운%승강
尿道%鳞癌%cDNA文库
尿道%鱗癌%cDNA文庫
뇨도%린암%cDNA문고
为了进一步分离人尿道(阴茎)鳞癌组织特异性表达基因和鳞癌特异性相关基因,采用SMART技术,构建了人尿道(阴茎)鳞癌上皮细胞cDNA文库,从人尿道(阴茎)鳞癌上皮细胞中分离总RNA并纯化mRNA,利用经修饰的oligo(dT)引物合成cDNA第一链,利用SMART核苷酸作为cDNA第一链在mRNA5′端延伸出去的模板,采用LD-PCR合成双链cDNA,双链cDNA经酶切和过柱分级分离后,克隆入λTriplEx2载体后经体外包装而成cDNA文库.结果表明原始人尿道(阴茎)鳞癌上皮cDNA文库获得1.57×107个重组子,重组率达到98%.文库扩增后,滴度达到4.0×109pfu/ml,插入cDNA平均长度为2.5kb. 构建的人尿道(阴茎)鳞癌上皮cDNA文库具有良好的质量,该cDNA文库为进一步筛选鳞癌抑癌基因及鳞癌特异性表达基因奠定了基础.
為瞭進一步分離人尿道(陰莖)鱗癌組織特異性錶達基因和鱗癌特異性相關基因,採用SMART技術,構建瞭人尿道(陰莖)鱗癌上皮細胞cDNA文庫,從人尿道(陰莖)鱗癌上皮細胞中分離總RNA併純化mRNA,利用經脩飾的oligo(dT)引物閤成cDNA第一鏈,利用SMART覈苷痠作為cDNA第一鏈在mRNA5′耑延伸齣去的模闆,採用LD-PCR閤成雙鏈cDNA,雙鏈cDNA經酶切和過柱分級分離後,剋隆入λTriplEx2載體後經體外包裝而成cDNA文庫.結果錶明原始人尿道(陰莖)鱗癌上皮cDNA文庫穫得1.57×107箇重組子,重組率達到98%.文庫擴增後,滴度達到4.0×109pfu/ml,插入cDNA平均長度為2.5kb. 構建的人尿道(陰莖)鱗癌上皮cDNA文庫具有良好的質量,該cDNA文庫為進一步篩選鱗癌抑癌基因及鱗癌特異性錶達基因奠定瞭基礎.
위료진일보분리인뇨도(음경)린암조직특이성표체기인화린암특이성상관기인,채용SMART기술,구건료인뇨도(음경)린암상피세포cDNA문고,종인뇨도(음경)린암상피세포중분리총RNA병순화mRNA,이용경수식적oligo(dT)인물합성cDNA제일련,이용SMART핵감산작위cDNA제일련재mRNA5′단연신출거적모판,채용LD-PCR합성쌍련cDNA,쌍련cDNA경매절화과주분급분리후,극륭입λTriplEx2재체후경체외포장이성cDNA문고.결과표명원시인뇨도(음경)린암상피cDNA문고획득1.57×107개중조자,중조솔체도98%.문고확증후,적도체도4.0×109pfu/ml,삽입cDNA평균장도위2.5kb. 구건적인뇨도(음경)린암상피cDNA문고구유량호적질량,해cDNA문고위진일보사선린암억암기인급린암특이성표체기인전정료기출.
