人抗HBsAg单链抗体/鱼精蛋白截短体融合蛋白基因的构建、表达及活性鉴定
인항HBsAg단련항체/어정단백절단체융합단백기인적구건、표체급활성감정
Construction and expression of human anti-HBsAg ScFv/tP fusion protein in E. coli and identification of its binding activity
  • 万方数据
    第四军医大学学报 제사군의대학학보
    JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
    2006年 15期 1349-1352 ,共4页

    孟艳玲%温伟红%薛茜%张勇%张巍%鲍炜%任君琳%贾林涛%王成济%杨安钢

    맹염령%온위홍%설천%장용%장외%포위%임군림%가림도%왕성제%양안강

    单链抗体%肝炎表面抗原,乙型%鱼精蛋白类 單鏈抗體%肝炎錶麵抗原,乙型%魚精蛋白類
    단련항체%간염표면항원,을형%어정단백류
    目的:构建人抗HBsAg单链抗体(ScFv)/鱼精蛋白截短体(truncated protamine, tP)融合基因,在大肠杆菌中进行表达纯化并分析ScFv/tP融合蛋白的活性. 方法:设计引物扩增人抗HBsAg ScFv HBs15基因,在其3'端引物引入tP的编码基因,PCR扩增获得ScFv/tP融合基因,将其克隆入原核表达载体pET-32a后,在大肠杆菌BL2l(DE3)LysS内诱导表达. 表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定后,用Ni-NTA螯合层析介质纯化. 间接ELISA分析ScFv/tP融合蛋白的亲和活性,凝胶迁移阻滞实验检测ScFv/tP融合蛋白与DNA结合的情况. 结果:成功获得人抗HBsAg ScFv/tP融合基因,经IPTG诱导后在大肠杆菌中表达,表达的ScFv/tP融合蛋白不仅保持了与HBsAg结合的能力,同时具有DNA结合活性. 结论:ScFv与tP融合后,同时具有与抗原和DNA结合的活性,为该ScFv的进一步应用奠定了基础.
    목적:구건인항HBsAg단련항체(ScFv)/어정단백절단체(truncated protamine, tP)융합기인,재대장간균중진행표체순화병분석ScFv/tP융합단백적활성. 방법:설계인물확증인항HBsAg ScFv HBs15기인,재기3'단인물인입tP적편마기인,PCR확증획득ScFv/tP융합기인,장기극륭입원핵표체재체pET-32a후,재대장간균BL2l(DE3)LysS내유도표체. 표체산물경SDS-PAGE급Western blot감정후,용Ni-NTA오합층석개질순화. 간접ELISA분석ScFv/tP융합단백적친화활성,응효천이조체실험검측ScFv/tP융합단백여DNA결합적정황. 결과:성공획득인항HBsAg ScFv/tP융합기인,경IPTG유도후재대장간균중표체,표체적ScFv/tP융합단백불부보지료여HBsAg결합적능력,동시구유DNA결합활성. 결론:ScFv여tP융합후,동시구유여항원화DNA결합적활성,위해ScFv적진일보응용전정료기출.
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