植物保护
植物保護
식물보호
PLANT PROTECTION
2008年
2期
90-93
,共4页
张争%张杨%徐进%许景升%何礼远%冯洁
張爭%張楊%徐進%許景升%何禮遠%馮潔
장쟁%장양%서진%허경승%하례원%풍길
高GC%PCR%正交试验
高GC%PCR%正交試驗
고GC%PCR%정교시험
通过添加增效剂、正交试验设计优化PCR反应体系、联合采用多种PCR程序等措施,建立并优化了PCR扩增体系,成功地从高GC青枯菌基因组中扩增出了长度为2 434 bp且GC含量高达70.9%的aac基因.PCR反应体系为20 uL包括5%DMSO、2.5 mmol/L MgCl2、500 umol/L dNTP、10 pmol/L 引物、1.25 U Taq酶、50 ng模板DNA.首先采用热启动PCR:95℃5 min,保持80℃,加入Taq酶;然后采用二步PCR:5个循环包括变性95℃1 min,65℃1 min;最后采用降落PCR;30个循环为95℃1 min,78℃1 min,每个循环降低0.5℃,72℃3 min;补充10个循环为95℃1 min,63℃1 min,72℃3 min;72℃10 min.该试验体系的建立与优化为研究高GC含量生物的基因功能提供了方法.
通過添加增效劑、正交試驗設計優化PCR反應體繫、聯閤採用多種PCR程序等措施,建立併優化瞭PCR擴增體繫,成功地從高GC青枯菌基因組中擴增齣瞭長度為2 434 bp且GC含量高達70.9%的aac基因.PCR反應體繫為20 uL包括5%DMSO、2.5 mmol/L MgCl2、500 umol/L dNTP、10 pmol/L 引物、1.25 U Taq酶、50 ng模闆DNA.首先採用熱啟動PCR:95℃5 min,保持80℃,加入Taq酶;然後採用二步PCR:5箇循環包括變性95℃1 min,65℃1 min;最後採用降落PCR;30箇循環為95℃1 min,78℃1 min,每箇循環降低0.5℃,72℃3 min;補充10箇循環為95℃1 min,63℃1 min,72℃3 min;72℃10 min.該試驗體繫的建立與優化為研究高GC含量生物的基因功能提供瞭方法.
통과첨가증효제、정교시험설계우화PCR반응체계、연합채용다충PCR정서등조시,건립병우화료PCR확증체계,성공지종고GC청고균기인조중확증출료장도위2 434 bp차GC함량고체70.9%적aac기인.PCR반응체계위20 uL포괄5%DMSO、2.5 mmol/L MgCl2、500 umol/L dNTP、10 pmol/L 인물、1.25 U Taq매、50 ng모판DNA.수선채용열계동PCR:95℃5 min,보지80℃,가입Taq매;연후채용이보PCR:5개순배포괄변성95℃1 min,65℃1 min;최후채용강락PCR;30개순배위95℃1 min,78℃1 min,매개순배강저0.5℃,72℃3 min;보충10개순배위95℃1 min,63℃1 min,72℃3 min;72℃10 min.해시험체계적건립여우화위연구고GC함량생물적기인공능제공료방법.
