中国病原生物学杂志
中國病原生物學雜誌
중국병원생물학잡지
JOURNAL OF PATHOGEN BIOLOGY
2008年
3期
190-193,214
,共5页
田小东%古钦民%周怀瑜%张加勤%丛华%赵群力%李瑛
田小東%古欽民%週懷瑜%張加勤%叢華%趙群力%李瑛
전소동%고흠민%주부유%장가근%총화%조군력%리영
刚地弓形虫%MIC3%SAG1%疫苗%构建%表达
剛地弓形蟲%MIC3%SAG1%疫苗%構建%錶達
강지궁형충%MIC3%SAG1%역묘%구건%표체
目的 构建编码弓形虫RH株膜表面蛋白1(SAG1)和微线体蛋白3(MIC3)的重组真核表达载体pcDNA3.1-SAG1-MIC3并鉴定,为弓形虫疫苗研制作准备. 方法 采用PCR技术从弓形虫基因组DNA中分别扩增SAG1和MIC3基因片段,分别克隆入pMD18-T载体,并对重组入外源基因的质粒通过PCR、酶切和测序鉴定;采用亚克隆技术将SAG1和MIC3基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-),经含氨苄青霉素的LB平板筛选阳性重组质粒pcDNA3.1-SAG1-MIC3,PCR、酶切和测序鉴定;采用脂质体法将重组载体转染Hela细胞,经RT-PCR法检测转染细胞转录情况. 结果 MIC3和SAG1基因的TA-cloning经PCR和酶切鉴定,大小分别为933 bp和789 bp,与预期值一致;pcNDA3.1-SAG1-MIC3经酶切鉴定,目的片段约为1 722 bp,与SAG1-MIC3长度相当;测定重组载体的核苷酸序列,与GenBank中的相应序列100%同源;PCR验证载体携带的SAG1-MIC3融合基因在Hela细胞中转录生成mRNA. 结论 成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1-SAG1-MIC3,为弓形虫核酸疫苗的研制奠定了基础.
目的 構建編碼弓形蟲RH株膜錶麵蛋白1(SAG1)和微線體蛋白3(MIC3)的重組真覈錶達載體pcDNA3.1-SAG1-MIC3併鑒定,為弓形蟲疫苗研製作準備. 方法 採用PCR技術從弓形蟲基因組DNA中分彆擴增SAG1和MIC3基因片段,分彆剋隆入pMD18-T載體,併對重組入外源基因的質粒通過PCR、酶切和測序鑒定;採用亞剋隆技術將SAG1和MIC3基因剋隆至真覈錶達載體pcDNA3.1(-),經含氨芐青黴素的LB平闆篩選暘性重組質粒pcDNA3.1-SAG1-MIC3,PCR、酶切和測序鑒定;採用脂質體法將重組載體轉染Hela細胞,經RT-PCR法檢測轉染細胞轉錄情況. 結果 MIC3和SAG1基因的TA-cloning經PCR和酶切鑒定,大小分彆為933 bp和789 bp,與預期值一緻;pcNDA3.1-SAG1-MIC3經酶切鑒定,目的片段約為1 722 bp,與SAG1-MIC3長度相噹;測定重組載體的覈苷痠序列,與GenBank中的相應序列100%同源;PCR驗證載體攜帶的SAG1-MIC3融閤基因在Hela細胞中轉錄生成mRNA. 結論 成功構建重組真覈錶達載體pcDNA3.1-SAG1-MIC3,為弓形蟲覈痠疫苗的研製奠定瞭基礎.
목적 구건편마궁형충RH주막표면단백1(SAG1)화미선체단백3(MIC3)적중조진핵표체재체pcDNA3.1-SAG1-MIC3병감정,위궁형충역묘연제작준비. 방법 채용PCR기술종궁형충기인조DNA중분별확증SAG1화MIC3기인편단,분별극륭입pMD18-T재체,병대중조입외원기인적질립통과PCR、매절화측서감정;채용아극륭기술장SAG1화MIC3기인극륭지진핵표체재체pcDNA3.1(-),경함안변청매소적LB평판사선양성중조질립pcDNA3.1-SAG1-MIC3,PCR、매절화측서감정;채용지질체법장중조재체전염Hela세포,경RT-PCR법검측전염세포전록정황. 결과 MIC3화SAG1기인적TA-cloning경PCR화매절감정,대소분별위933 bp화789 bp,여예기치일치;pcNDA3.1-SAG1-MIC3경매절감정,목적편단약위1 722 bp,여SAG1-MIC3장도상당;측정중조재체적핵감산서렬,여GenBank중적상응서렬100%동원;PCR험증재체휴대적SAG1-MIC3융합기인재Hela세포중전록생성mRNA. 결론 성공구건중조진핵표체재체pcDNA3.1-SAG1-MIC3,위궁형충핵산역묘적연제전정료기출.
