CAJ | 학술논문

背景:最近有研究者采用神经干细胞的无血清培养基从脑肿瘤组织中培养出肿瘤干细胞.目的:探讨利用无血清培养基从原发胶质母细胞瘤组织中分离培养胶质瘤千细胞的可行性.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-08在山东省青岛市脑科研究所完成.材料:胶质瘤组织来自青岛大学医学院附属医院神经外科手术切除标本,DMEM/F12培养基、B27为GIBCO公司产品,碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子Peprotech公司产品.方法:无菌条件下取肿瘤深部无坏死囊变、来电凝组织,剪切消化成单细胞悬液后,加入含碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、B27添加剂的无血清DMEM/F12培养基,体外分离培养获得胶质瘤干细胞.待培养孔中细胞团数量增多、培养液刚刚变色时,吸取含有细胞团的培养液进行传代.取第3代胶质瘤十细胞,加入巢蛋白和CD133抗体行免疫荧光检测;加入含体积分数为0.1胎牛血清的DMEM/F12培养基诱导5 d,行胶质纤维酸性蛋白免疫荧光染色观察分化情况.主要观察指标:原代与传代培养的胶质瘤干细胞形态及生长情况,胶质瘤干细胞巢蛋白、CD133的表达及其分化.结果:原代培养7-10 d可形成大小不一的细胞团,球形或近似球形,呈悬浮或半悬浮状态牛长.细胞形态均,折光性好:传代24 h后次代细胞团形成,细胞的大小,形态与原代无明显差别,连续传代5次后细胞团增殖活跃.第3代胶质瘤干细胞呈巢蛋白和CD133阳性表达,加入胎牛血清后细胞球贴壁分化,呈胶质纤维酸性蛋白阳性.结论:人脑胶质瘤组织中存在胶质瘤下细胞,在体外无血清条件下可保持未分化的悬浮状态;加入血清后贴壁分化呈胶质瘤细胞样或神经元样,符合于细胞的自我繁殖和多向分化特征.
배경:최근유연구자채용신경간세포적무혈청배양기종뇌종류조직중배양출종류간세포.목적:탐토이용무혈청배양기종원발효질모세포류조직중분리배양효질류천세포적가행성.설계、시간급지점:세포학체외관찰,우2008-08재산동성청도시뇌과연구소완성.재료:효질류조직래자청도대학의학원부속의원신경외과수술절제표본,DMEM/F12배양기、B27위GIBCO공사산품,감성성섬유세포생장인자、표피생장인자Peprotech공사산품.방법:무균조건하취종류심부무배사낭변、래전응조직,전절소화성단세포현액후,가입함감성성섬유세포생장인자、표피생장인자、B27첨가제적무혈청DMEM/F12배양기,체외분리배양획득효질류간세포.대배양공중세포단수량증다、배양액강강변색시,흡취함유세포단적배양액진행전대.취제3대효질류십세포,가입소단백화CD133항체행면역형광검측;가입함체적분수위0.1태우혈청적DMEM/F12배양기유도5 d,행효질섬유산성단백면역형광염색관찰분화정황.주요관찰지표:원대여전대배양적효질류간세포형태급생장정황,효질류간세포소단백、CD133적표체급기분화.결과:원대배양7-10 d가형성대소불일적세포단,구형혹근사구형,정현부혹반현부상태우장.세포형태균,절광성호:전대24 h후차대세포단형성,세포적대소,형태여원대무명현차별,련속전대5차후세포단증식활약.제3대효질류간세포정소단백화CD133양성표체,가입태우혈청후세포구첩벽분화,정효질섬유산성단백양성.결론:인뇌효질류조직중존재효질류하세포,재체외무혈청조건하가보지미분화적현부상태;가입혈청후첩벽분화정효질류세포양혹신경원양,부합우세포적자아번식화다향분화특정.