广东医学院学报
廣東醫學院學報
엄동의학원학보
JOURNAL OF GUANGDONG MEDICAL COLLEGE
2009年
5期
481-484
,共4页
肖德乾%肖欢%胡国艳%那志萍%郑淑华%刘伟%张良清%徐军发
肖德乾%肖歡%鬍國豔%那誌萍%鄭淑華%劉偉%張良清%徐軍髮
초덕건%초환%호국염%나지평%정숙화%류위%장량청%서군발
B7-H4%原核表达载体%基因表达%多克隆抗体
B7-H4%原覈錶達載體%基因錶達%多剋隆抗體
B7-H4%원핵표체재체%기인표체%다극륭항체
目的 探讨小鼠B7-H4原核表达载体的构建、表达及多克隆抗体的制备.方法 采用特异性引物扩增小鼠B7-H4(mB7-H4)胞外功能区DNA,经酶切、拼接构建原核表达载体pET28a-mB7-H4.将构建的重组表达质粒转化入E.coli BL21 (DE3)菌株,采用IPTG诱导表达、Ni-NTA柱亲和层析纯化目的蛋白、SDS-PAGE分析蛋白纯度.将纯化的目的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并对其进行纯化及鉴定.结果 序列测定证实了构建的pET28a-mB7-H4重组表达载体含有mB7-H4编码序列,其序列分析与GenBank中公布序列对比一致,质粒在E.coli中诱导表达相对分子质量(Mr)为26.5 KD的目的蛋白,SDS-PAGE分析表明纯化后的目的蛋白达到电泳纯.双向琼脂扩散法检测抗体效价为1∶16,ELISA法检测抗体效价为1∶12 800,Western blot分析显示抗体能特异性结合mB7-H4.结论 成功制备了高表达重组mB7-H4蛋白的原核表达载体及高效价抗mB7-H4多克隆抗体,为进一步研究B7-H4的功能奠定了基础.
目的 探討小鼠B7-H4原覈錶達載體的構建、錶達及多剋隆抗體的製備.方法 採用特異性引物擴增小鼠B7-H4(mB7-H4)胞外功能區DNA,經酶切、拼接構建原覈錶達載體pET28a-mB7-H4.將構建的重組錶達質粒轉化入E.coli BL21 (DE3)菌株,採用IPTG誘導錶達、Ni-NTA柱親和層析純化目的蛋白、SDS-PAGE分析蛋白純度.將純化的目的蛋白免疫傢兔製備多剋隆抗體,併對其進行純化及鑒定.結果 序列測定證實瞭構建的pET28a-mB7-H4重組錶達載體含有mB7-H4編碼序列,其序列分析與GenBank中公佈序列對比一緻,質粒在E.coli中誘導錶達相對分子質量(Mr)為26.5 KD的目的蛋白,SDS-PAGE分析錶明純化後的目的蛋白達到電泳純.雙嚮瓊脂擴散法檢測抗體效價為1∶16,ELISA法檢測抗體效價為1∶12 800,Western blot分析顯示抗體能特異性結閤mB7-H4.結論 成功製備瞭高錶達重組mB7-H4蛋白的原覈錶達載體及高效價抗mB7-H4多剋隆抗體,為進一步研究B7-H4的功能奠定瞭基礎.
목적 탐토소서B7-H4원핵표체재체적구건、표체급다극륭항체적제비.방법 채용특이성인물확증소서B7-H4(mB7-H4)포외공능구DNA,경매절、병접구건원핵표체재체pET28a-mB7-H4.장구건적중조표체질립전화입E.coli BL21 (DE3)균주,채용IPTG유도표체、Ni-NTA주친화층석순화목적단백、SDS-PAGE분석단백순도.장순화적목적단백면역가토제비다극륭항체,병대기진행순화급감정.결과 서렬측정증실료구건적pET28a-mB7-H4중조표체재체함유mB7-H4편마서렬,기서렬분석여GenBank중공포서렬대비일치,질립재E.coli중유도표체상대분자질량(Mr)위26.5 KD적목적단백,SDS-PAGE분석표명순화후적목적단백체도전영순.쌍향경지확산법검측항체효개위1∶16,ELISA법검측항체효개위1∶12 800,Western blot분석현시항체능특이성결합mB7-H4.결론 성공제비료고표체중조mB7-H4단백적원핵표체재체급고효개항mB7-H4다극륭항체,위진일보연구B7-H4적공능전정료기출.
