生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2010年
3期
304-309
,共6页
王立良%王淼%张玉建%王浩%刘勇%邵一鸣
王立良%王淼%張玉建%王浩%劉勇%邵一鳴
왕립량%왕묘%장옥건%왕호%류용%소일명
增强子%Cre重组酶%转基因小鼠%ROSA26报告小鼠%LacZ染色
增彊子%Cre重組酶%轉基因小鼠%ROSA26報告小鼠%LacZ染色
증강자%Cre중조매%전기인소서%ROSA26보고소서%LacZ염색
目的:探索将增强子应用于构建Cre转基因小鼠品系,为以条件基因敲除为基础的基因功能研究提供更多的工具.方法:通过PCR方法从小鼠的细菌人工染色体扩增UH增强子片段,构建含有Hsp68基础启动子、增强子UH、Cre重组酶基因和SV40 polyA的转基因载体pLW400,将3.3 kb的转基因片段通过显微注射导入小鼠受精卵;为了检测Cre在转基因小鼠中的表达,将转基因一代小鼠与纯合子ROSA26报告小鼠(R/R)交配,收集第14 d胚胎期(E14)的舌组织进行LacZ染色检测鉴定.结果:经鉴定,31只子代小鼠中有6只携带外源基因,整合率为19.4%;与R/+对照相比,E14期的双基因型Cre,R/+舌组织为阳性结果(蓝色).这表明Cre基因在转基因小鼠舌组织内得到表达,并在体内介导ROSA26基因座loxP位点间的重组,且有效删除了2个loxP之间的片段,从而启动了LacZ基因的表达.结论:构建了UH增强子-Hsp68Cre的转基因小鼠,在舌肌中特异表达Cre基因,提示增强子可以被选择应用于Cre转基因小鼠的构建;为舌肌的发育和再生研究奠定了基础.
目的:探索將增彊子應用于構建Cre轉基因小鼠品繫,為以條件基因敲除為基礎的基因功能研究提供更多的工具.方法:通過PCR方法從小鼠的細菌人工染色體擴增UH增彊子片段,構建含有Hsp68基礎啟動子、增彊子UH、Cre重組酶基因和SV40 polyA的轉基因載體pLW400,將3.3 kb的轉基因片段通過顯微註射導入小鼠受精卵;為瞭檢測Cre在轉基因小鼠中的錶達,將轉基因一代小鼠與純閤子ROSA26報告小鼠(R/R)交配,收集第14 d胚胎期(E14)的舌組織進行LacZ染色檢測鑒定.結果:經鑒定,31隻子代小鼠中有6隻攜帶外源基因,整閤率為19.4%;與R/+對照相比,E14期的雙基因型Cre,R/+舌組織為暘性結果(藍色).這錶明Cre基因在轉基因小鼠舌組織內得到錶達,併在體內介導ROSA26基因座loxP位點間的重組,且有效刪除瞭2箇loxP之間的片段,從而啟動瞭LacZ基因的錶達.結論:構建瞭UH增彊子-Hsp68Cre的轉基因小鼠,在舌肌中特異錶達Cre基因,提示增彊子可以被選擇應用于Cre轉基因小鼠的構建;為舌肌的髮育和再生研究奠定瞭基礎.
목적:탐색장증강자응용우구건Cre전기인소서품계,위이조건기인고제위기출적기인공능연구제공경다적공구.방법:통과PCR방법종소서적세균인공염색체확증UH증강자편단,구건함유Hsp68기출계동자、증강자UH、Cre중조매기인화SV40 polyA적전기인재체pLW400,장3.3 kb적전기인편단통과현미주사도입소서수정란;위료검측Cre재전기인소서중적표체,장전기인일대소서여순합자ROSA26보고소서(R/R)교배,수집제14 d배태기(E14)적설조직진행LacZ염색검측감정.결과:경감정,31지자대소서중유6지휴대외원기인,정합솔위19.4%;여R/+대조상비,E14기적쌍기인형Cre,R/+설조직위양성결과(람색).저표명Cre기인재전기인소서설조직내득도표체,병재체내개도ROSA26기인좌loxP위점간적중조,차유효산제료2개loxP지간적편단,종이계동료LacZ기인적표체.결론:구건료UH증강자-Hsp68Cre적전기인소서,재설기중특이표체Cre기인,제시증강자가이피선택응용우Cre전기인소서적구건;위설기적발육화재생연구전정료기출.
