柔性肽串联四价Aβ15重组腺病毒的构建及纯化
유성태천련사개Aβ15중조선병독적구건급순화
Construction and purification of flexible peptide linked quadrivalent Aβ15 adenovirus
  • 万方数据
    解剖学研究 해부학연구
    ANATOMY RESEARCH
    2010年 6期 426-430 ,共5页

    邹俊涛%何芬%牛道立%徐杰%杨俊华%李少阳%汪华侨%袁群芳%姚志彬

    추준도%하분%우도립%서걸%양준화%리소양%왕화교%원군방%요지빈

    β-淀粉样蛋白%串联重复%重组腺病毒%阿尔茨海默病 β-澱粉樣蛋白%串聯重複%重組腺病毒%阿爾茨海默病
    β-정분양단백%천련중복%중조선병독%아이자해묵병
    目的 构建并纯化含有柔性肽串联四价β-淀粉样蛋白(Aβ15)的重组腺病毒疫苗,用于老年性痴呆的预防和治疗.方法 酶切获取带有IgG к轻链信号肽序列的柔性肽串联四价Aβ15基因,定向克隆于穿梭质粒pAdTrack-CMV中.通过与腺病毒骨架载体pAdeasy-1在细菌内同源重组形成重组腺病毒质粒pAd-4×Aβ15,转染人胚肾293细胞后包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒(Ad-4×Aβ15).Western检测4×Aβ15在培养液中的分泌表达.氯化铯密度梯度离心纯化重组腺病毒Ad-4×Aβ15.结果 pAdTrack-4×Aβ15测序结果和预期一致,同源重组并经293细胞包装后形成重组腺病毒Ad-4×Aβ15,western检测4×Aβ15在培养上清中表达.经氯化铯密度梯度离心纯化后Ad-4×Aβ15病毒颗粒数约为4.6×1012 VP/mL.结论 成功制备了重组腺病毒Ad-4×Aβ15,感染细胞证实其呈分泌表达,经氯化铯密度梯度离心纯化后得到高滴度的重组腺病毒.为老年性痴呆(Alzheimer's disease,AD)的实验治疗打下基础.
    목적 구건병순화함유유성태천련사개β-정분양단백(Aβ15)적중조선병독역묘,용우노년성치태적예방화치료.방법 매절획취대유IgG к경련신호태서렬적유성태천련사개Aβ15기인,정향극륭우천사질립pAdTrack-CMV중.통과여선병독골가재체pAdeasy-1재세균내동원중조형성중조선병독질립pAd-4×Aβ15,전염인배신293세포후포장성유감염능력적중조선병독과립(Ad-4×Aβ15).Western검측4×Aβ15재배양액중적분비표체.록화색밀도제도리심순화중조선병독Ad-4×Aβ15.결과 pAdTrack-4×Aβ15측서결과화예기일치,동원중조병경293세포포장후형성중조선병독Ad-4×Aβ15,western검측4×Aβ15재배양상청중표체.경록화색밀도제도리심순화후Ad-4×Aβ15병독과립수약위4.6×1012 VP/mL.결론 성공제비료중조선병독Ad-4×Aβ15,감염세포증실기정분비표체,경록화색밀도제도리심순화후득도고적도적중조선병독.위노년성치태(Alzheimer's disease,AD)적실험치료타하기출.
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