华北农学报
華北農學報
화북농학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA
2011年
2期
70-75
,共6页
王军%王瑞%杨莲茹%郭志亮%于翠玲%申之义
王軍%王瑞%楊蓮茹%郭誌亮%于翠玲%申之義
왕군%왕서%양련여%곽지량%우취령%신지의
布鲁菌%bp26%omp10%同源%分析
佈魯菌%bp26%omp10%同源%分析
포로균%bp26%omp10%동원%분석
为明确试验布鲁菌和参考布鲁菌菌株与基因库中布鲁菌外膜蛋白BP26和OMP10基因间的同源性.利用布鲁菌外膜蛋白bp26和omp10基因,针对试验布鲁菌和参考布鲁菌菌株进行克隆和序列分析.根据GenBank发表的布鲁菌bp26基因和omp10基因,分别设计合成一对特异性引物,以提取的试验布鲁菌和2株参考布鲁菌的总DNA为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)技术扩增得到bp26和omp10基因,回收纯化后将这两个基因分别连接到pMD18-T载体上,热激发转化受体菌大肠杆菌DH5a,质粒提取、PCR鉴定、测序.结果表明,bp26全长为995 bp,包含一个由753 bp组成的完整开放阅读框,试验菌株的同源性为100%,与参考菌株M5、S2的同源性分别为100%和99.9%,与参考序列S19、870的同源性分别为99.9%和100%.omp10全长531 bp,包含一个由396 bp组成的完整开放阅读框,试验菌株的同源性为100%,与参考菌株M5、S2的同源性均分别为100%,与参考序列544的同源性分别为99.7%.证实bp26基因和omp10基因在各种型间的同源性都在99%以上,表明这两个基因在布鲁菌属是高度保守的.
為明確試驗佈魯菌和參攷佈魯菌菌株與基因庫中佈魯菌外膜蛋白BP26和OMP10基因間的同源性.利用佈魯菌外膜蛋白bp26和omp10基因,針對試驗佈魯菌和參攷佈魯菌菌株進行剋隆和序列分析.根據GenBank髮錶的佈魯菌bp26基因和omp10基因,分彆設計閤成一對特異性引物,以提取的試驗佈魯菌和2株參攷佈魯菌的總DNA為模闆,通過聚閤酶鏈式反應(PCR)技術擴增得到bp26和omp10基因,迴收純化後將這兩箇基因分彆連接到pMD18-T載體上,熱激髮轉化受體菌大腸桿菌DH5a,質粒提取、PCR鑒定、測序.結果錶明,bp26全長為995 bp,包含一箇由753 bp組成的完整開放閱讀框,試驗菌株的同源性為100%,與參攷菌株M5、S2的同源性分彆為100%和99.9%,與參攷序列S19、870的同源性分彆為99.9%和100%.omp10全長531 bp,包含一箇由396 bp組成的完整開放閱讀框,試驗菌株的同源性為100%,與參攷菌株M5、S2的同源性均分彆為100%,與參攷序列544的同源性分彆為99.7%.證實bp26基因和omp10基因在各種型間的同源性都在99%以上,錶明這兩箇基因在佈魯菌屬是高度保守的.
위명학시험포로균화삼고포로균균주여기인고중포로균외막단백BP26화OMP10기인간적동원성.이용포로균외막단백bp26화omp10기인,침대시험포로균화삼고포로균균주진행극륭화서렬분석.근거GenBank발표적포로균bp26기인화omp10기인,분별설계합성일대특이성인물,이제취적시험포로균화2주삼고포로균적총DNA위모판,통과취합매련식반응(PCR)기술확증득도bp26화omp10기인,회수순화후장저량개기인분별련접도pMD18-T재체상,열격발전화수체균대장간균DH5a,질립제취、PCR감정、측서.결과표명,bp26전장위995 bp,포함일개유753 bp조성적완정개방열독광,시험균주적동원성위100%,여삼고균주M5、S2적동원성분별위100%화99.9%,여삼고서렬S19、870적동원성분별위99.9%화100%.omp10전장531 bp,포함일개유396 bp조성적완정개방열독광,시험균주적동원성위100%,여삼고균주M5、S2적동원성균분별위100%,여삼고서렬544적동원성분별위99.7%.증실bp26기인화omp10기인재각충형간적동원성도재99%이상,표명저량개기인재포로균속시고도보수적.
