华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2011年
5期
546-549,566
,共5页
廖立红%郑锐丹%王成斌%应艳琴%罗小平
廖立紅%鄭銳丹%王成斌%應豔琴%囉小平
료립홍%정예단%왕성빈%응염금%라소평
细胞信号转导抑制因子3%短发夹RNA%RNA干扰
細胞信號轉導抑製因子3%短髮夾RNA%RNA榦擾
세포신호전도억제인자3%단발협RNA%RNA간우
目的 构建针对大鼠细胞信号转导抑制因子3(SOCS-3)基因的短发夹RNA(shRNA)表达载体,选取最有效shRNA模板序列.方法 设计并合成编码的shRNA的2条寡核苷酸序列,经退火成互补双链,再克隆至pGPU6/GFP/Neo中构建重组表达载体,转化DH5α菌株,进行序列测定;转染至骨骼肌细胞中.Real-time PCR和Western blot 检测各组SOCS-3的表达情况.结果 测序证实重组质粒构建成功.4对shRNA模板序列对SOCS-3的表达抑制与空白及阴性对照相比差异均有统计学意义(均P＜0.05),且以SOCS-3-shRNA a干预效果较好.结论 SOCS-3特异性shRNA重组表达载体构建成功,能有效抑制大鼠骨骼肌细胞SOCS-3的表达,为后续研究及代谢综合征的基因治疗奠定了基础.
目的 構建針對大鼠細胞信號轉導抑製因子3(SOCS-3)基因的短髮夾RNA(shRNA)錶達載體,選取最有效shRNA模闆序列.方法 設計併閤成編碼的shRNA的2條寡覈苷痠序列,經退火成互補雙鏈,再剋隆至pGPU6/GFP/Neo中構建重組錶達載體,轉化DH5α菌株,進行序列測定;轉染至骨骼肌細胞中.Real-time PCR和Western blot 檢測各組SOCS-3的錶達情況.結果 測序證實重組質粒構建成功.4對shRNA模闆序列對SOCS-3的錶達抑製與空白及陰性對照相比差異均有統計學意義(均P＜0.05),且以SOCS-3-shRNA a榦預效果較好.結論 SOCS-3特異性shRNA重組錶達載體構建成功,能有效抑製大鼠骨骼肌細胞SOCS-3的錶達,為後續研究及代謝綜閤徵的基因治療奠定瞭基礎.
목적 구건침대대서세포신호전도억제인자3(SOCS-3)기인적단발협RNA(shRNA)표체재체,선취최유효shRNA모판서렬.방법 설계병합성편마적shRNA적2조과핵감산서렬,경퇴화성호보쌍련,재극륭지pGPU6/GFP/Neo중구건중조표체재체,전화DH5α균주,진행서렬측정;전염지골격기세포중.Real-time PCR화Western blot 검측각조SOCS-3적표체정황.결과 측서증실중조질립구건성공.4대shRNA모판서렬대SOCS-3적표체억제여공백급음성대조상비차이균유통계학의의(균P＜0.05),차이SOCS-3-shRNA a간예효과교호.결론 SOCS-3특이성shRNA중조표체재체구건성공,능유효억제대서골격기세포SOCS-3적표체,위후속연구급대사종합정적기인치료전정료기출.
