中华神经科杂志
中華神經科雜誌
중화신경과잡지
Chinese Journal of Neurology
2007年
8期
560-563
,共4页
许文华%许功林%陈兵%鲁云霞%任明山
許文華%許功林%陳兵%魯雲霞%任明山
허문화%허공림%진병%로운하%임명산
重症肌无力%实验性自身免疫性%受体,胆碱能%重组融合蛋白质类
重癥肌無力%實驗性自身免疫性%受體,膽堿能%重組融閤蛋白質類
중증기무력%실험성자신면역성%수체,담감능%중조융합단백질류
目的 克隆和表达人乙酰胆碱受体α亚基1-210(hAChRα1-210),并以该表达产物免疫Lewis鼠诱导实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)模型.方法 将经逆转录-PCR扩增出的目的 基因片段AChR α1-210在大肠杆菌中诱导表达,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot鉴定表达产物为rhAChRα1-210.将凝胶上一定剂量rhAChRα1-210融合蛋白与完全氟氏佐剂(CFA)充分乳化后,经皮下多点注入实验组,对照组则注入等剂量与CFA充分混匀乳化的空菌总蛋白.观察免疫后鼠体重的变化,并给予Lennon临床评分;低频重复电刺激检查电衰减反应和ELISA法检测血清AChR-ab滴度作为评价造模是否成功的客观依据.结果 将一定量的表达产物rhAChR α1-210融合蛋白免疫Lewis鼠,并在4周后强化免疫一次.在强化免疫10 d后实验组(n=10)部分鼠出现体重下降和肌无力,至实验结束时实验组有7只鼠Lennon临床评分达1级以上,对照组未见体重下降和肌无力表现.低频重复电衰减检查显示实验组3 Hz和5 Hz衰减率分别为13.90%±4.20%、13.20%±2.62%,对照组则为5.60%±2.06%、7.70%±2.40%,两组比较差异有统计学意义.ELISA法检测血清AChR-ab滴度结果表明实验组阳性率为70%,对照组未出现阳性,两组比较差异有统计学意义.结论 采用rhAChRα1-210融合蛋白可成功诱导EAMG动物模型,与经典方法相比具有操作方法简单、成本较低、免疫原充足等优点.
目的 剋隆和錶達人乙酰膽堿受體α亞基1-210(hAChRα1-210),併以該錶達產物免疫Lewis鼠誘導實驗性自身免疫性重癥肌無力(EAMG)模型.方法 將經逆轉錄-PCR擴增齣的目的 基因片段AChR α1-210在大腸桿菌中誘導錶達,經SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和Western blot鑒定錶達產物為rhAChRα1-210.將凝膠上一定劑量rhAChRα1-210融閤蛋白與完全氟氏佐劑(CFA)充分乳化後,經皮下多點註入實驗組,對照組則註入等劑量與CFA充分混勻乳化的空菌總蛋白.觀察免疫後鼠體重的變化,併給予Lennon臨床評分;低頻重複電刺激檢查電衰減反應和ELISA法檢測血清AChR-ab滴度作為評價造模是否成功的客觀依據.結果 將一定量的錶達產物rhAChR α1-210融閤蛋白免疫Lewis鼠,併在4週後彊化免疫一次.在彊化免疫10 d後實驗組(n=10)部分鼠齣現體重下降和肌無力,至實驗結束時實驗組有7隻鼠Lennon臨床評分達1級以上,對照組未見體重下降和肌無力錶現.低頻重複電衰減檢查顯示實驗組3 Hz和5 Hz衰減率分彆為13.90%±4.20%、13.20%±2.62%,對照組則為5.60%±2.06%、7.70%±2.40%,兩組比較差異有統計學意義.ELISA法檢測血清AChR-ab滴度結果錶明實驗組暘性率為70%,對照組未齣現暘性,兩組比較差異有統計學意義.結論 採用rhAChRα1-210融閤蛋白可成功誘導EAMG動物模型,與經典方法相比具有操作方法簡單、成本較低、免疫原充足等優點.
목적 극륭화표체인을선담감수체α아기1-210(hAChRα1-210),병이해표체산물면역Lewis서유도실험성자신면역성중증기무력(EAMG)모형.방법 장경역전록-PCR확증출적목적 기인편단AChR α1-210재대장간균중유도표체,경SDS-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)화Western blot감정표체산물위rhAChRα1-210.장응효상일정제량rhAChRα1-210융합단백여완전불씨좌제(CFA)충분유화후,경피하다점주입실험조,대조조칙주입등제량여CFA충분혼균유화적공균총단백.관찰면역후서체중적변화,병급여Lennon림상평분;저빈중복전자격검사전쇠감반응화ELISA법검측혈청AChR-ab적도작위평개조모시부성공적객관의거.결과 장일정량적표체산물rhAChR α1-210융합단백면역Lewis서,병재4주후강화면역일차.재강화면역10 d후실험조(n=10)부분서출현체중하강화기무력,지실험결속시실험조유7지서Lennon림상평분체1급이상,대조조미견체중하강화기무력표현.저빈중복전쇠감검사현시실험조3 Hz화5 Hz쇠감솔분별위13.90%±4.20%、13.20%±2.62%,대조조칙위5.60%±2.06%、7.70%±2.40%,량조비교차이유통계학의의.ELISA법검측혈청AChR-ab적도결과표명실험조양성솔위70%,대조조미출현양성,량조비교차이유통계학의의.결론 채용rhAChRα1-210융합단백가성공유도EAMG동물모형,여경전방법상비구유조작방법간단、성본교저、면역원충족등우점.
