中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2007年
6期
540-545
,共6页
王林%柏世玉%陈婉南%李晖%林建银%林旭
王林%柏世玉%陳婉南%李暉%林建銀%林旭
왕림%백세옥%진완남%리휘%림건은%림욱
乙型肝炎病毒%α-干扰素%DNA聚合酶%末端蛋白
乙型肝炎病毒%α-榦擾素%DNA聚閤酶%末耑蛋白
을형간염병독%α-간우소%DNA취합매%말단단백
目的 确定乙型肝炎病毒(HBV)DNA聚合酶末端蛋白(terminal protein,TP)抗α-干扰素(IFN-αt)的功能区域.方法 PCR扩增IFN-α诱导人类6-16基因启动子并克隆入pCAT-Basic中,构建IFN-α反应报告载体p6-16CAT.以FuGENE6转染该报告载体至Huh7细胞并给予不同浓度IFN-α2a刺激,ELISA法检测细胞内氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的表达,建立Huh7细胞对IFN-α反应强弱的定量判定标准.构建TP(包括Spacer区)基因缺失突变体重组真核表达载体,通过融合表达的多肽表位抗体,Western blot法检测目的蛋白在Huh7细胞中的表达.重组表达载体分别与报告载体p6-16CAT共转染Huh7细胞,转染后48 h给予终浓度为100 IU/ml的IFN-α2a刺激,作用24 h后裂解细胞,通过检测胞内CAT含量高低评价各缺失突变体抗IFN-α作用,并据此确定TP(包括Spacer区)抗IFN-α作用的功能区域.结果 获得6-16基因启动子并构建IFN-α反应报告载体p6-16CAT.转染p6-16CAT的Huh7细胞在IFN-α2a刺激下CAT表达显著增强,且在IFN-α2a终浓度为100 IU/ml时达到最大.Western blot显示TP(包括Spacer区)各基因缺失突变体在Huh7细胞中表达相应蛋白.共转染p6-16CAT及部分/全长TP的Huh7细胞在IFN-α2a刺激下,胞内CAT值和对照组相比无显著差别,相反,全长TP+部分/全长Spacer使细胞内CAT值显著下降.结论 DNA聚合酶Spacer区与HBV抗IFN-α作用密切相关.
目的 確定乙型肝炎病毒(HBV)DNA聚閤酶末耑蛋白(terminal protein,TP)抗α-榦擾素(IFN-αt)的功能區域.方法 PCR擴增IFN-α誘導人類6-16基因啟動子併剋隆入pCAT-Basic中,構建IFN-α反應報告載體p6-16CAT.以FuGENE6轉染該報告載體至Huh7細胞併給予不同濃度IFN-α2a刺激,ELISA法檢測細胞內氯黴素乙酰基轉移酶(CAT)的錶達,建立Huh7細胞對IFN-α反應彊弱的定量判定標準.構建TP(包括Spacer區)基因缺失突變體重組真覈錶達載體,通過融閤錶達的多肽錶位抗體,Western blot法檢測目的蛋白在Huh7細胞中的錶達.重組錶達載體分彆與報告載體p6-16CAT共轉染Huh7細胞,轉染後48 h給予終濃度為100 IU/ml的IFN-α2a刺激,作用24 h後裂解細胞,通過檢測胞內CAT含量高低評價各缺失突變體抗IFN-α作用,併據此確定TP(包括Spacer區)抗IFN-α作用的功能區域.結果 穫得6-16基因啟動子併構建IFN-α反應報告載體p6-16CAT.轉染p6-16CAT的Huh7細胞在IFN-α2a刺激下CAT錶達顯著增彊,且在IFN-α2a終濃度為100 IU/ml時達到最大.Western blot顯示TP(包括Spacer區)各基因缺失突變體在Huh7細胞中錶達相應蛋白.共轉染p6-16CAT及部分/全長TP的Huh7細胞在IFN-α2a刺激下,胞內CAT值和對照組相比無顯著差彆,相反,全長TP+部分/全長Spacer使細胞內CAT值顯著下降.結論 DNA聚閤酶Spacer區與HBV抗IFN-α作用密切相關.
목적 학정을형간염병독(HBV)DNA취합매말단단백(terminal protein,TP)항α-간우소(IFN-αt)적공능구역.방법 PCR확증IFN-α유도인류6-16기인계동자병극륭입pCAT-Basic중,구건IFN-α반응보고재체p6-16CAT.이FuGENE6전염해보고재체지Huh7세포병급여불동농도IFN-α2a자격,ELISA법검측세포내록매소을선기전이매(CAT)적표체,건립Huh7세포대IFN-α반응강약적정량판정표준.구건TP(포괄Spacer구)기인결실돌변체중조진핵표체재체,통과융합표체적다태표위항체,Western blot법검측목적단백재Huh7세포중적표체.중조표체재체분별여보고재체p6-16CAT공전염Huh7세포,전염후48 h급여종농도위100 IU/ml적IFN-α2a자격,작용24 h후렬해세포,통과검측포내CAT함량고저평개각결실돌변체항IFN-α작용,병거차학정TP(포괄Spacer구)항IFN-α작용적공능구역.결과 획득6-16기인계동자병구건IFN-α반응보고재체p6-16CAT.전염p6-16CAT적Huh7세포재IFN-α2a자격하CAT표체현저증강,차재IFN-α2a종농도위100 IU/ml시체도최대.Western blot현시TP(포괄Spacer구)각기인결실돌변체재Huh7세포중표체상응단백.공전염p6-16CAT급부분/전장TP적Huh7세포재IFN-α2a자격하,포내CAT치화대조조상비무현저차별,상반,전장TP+부분/전장Spacer사세포내CAT치현저하강.결론 DNA취합매Spacer구여HBV항IFN-α작용밀절상관.
