CAJ | 학술논문

目的克隆并测定了克里米亚-刚果出血热病毒(CCHFV)中国分离株(新疆出血热病毒,XHFV)BA88166株核蛋白 (NP)基因的序列并实现其在细菌中的高效表达与临床诊断的应用. 方法病毒RNA经RT-PCR扩增出完整的NP基因.将扩增产物进行序列分析并克隆至融合表达载体pET32a,使重组质粒在大肠杆菌BL-21中高效表达.将融合蛋白经初步纯化后包被ELISA板用于抗体检测. 结果 XHFV BA88166株NP基因序列以及推导的氨基酸序列与其它XHFV的NP基因和蛋白序列同源性较高,在进化树上形成独立的分支.BA88166株NP基因编码482个氨基酸的核蛋白,推测的相对分子质量(Mr)约为54×103.在细菌中表达的融合蛋白经印迹试验证明具有良好的抗原性.以所建立的ELISA方法检测疫区人和动物血清的结果与IFA一致,并与临床诊断有很好的符合率.结论 BA88166株与其它XHFV BA66019、BA8402的NP基因在进化上关系密切,综合M基因的序列分析结果,人源分离株BA88166可能是来自蜱的BA8402变异株.表达于细菌中的核蛋白可作为安全的诊断性抗原用于临床检测及流行病学调查,所建立的方法准确、特异、简便、快速.
목적극륭병측정료극리미아-강과출혈열병독(CCHFV)중국분리주(신강출혈열병독,XHFV)BA88166주핵단백 (NP)기인적서렬병실현기재세균중적고효표체여림상진단적응용. 방법병독RNA경RT-PCR확증출완정적NP기인.장확증산물진행서렬분석병극륭지융합표체재체pET32a,사중조질립재대장간균BL-21중고효표체.장융합단백경초보순화후포피ELISA판용우항체검측. 결과 XHFV BA88166주NP기인서렬이급추도적안기산서렬여기타XHFV적NP기인화단백서렬동원성교고,재진화수상형성독립적분지.BA88166주NP기인편마482개안기산적핵단백,추측적상대분자질량(Mr)약위54×103.재세균중표체적융합단백경인적시험증명구유량호적항원성.이소건립적ELISA방법검측역구인화동물혈청적결과여IFA일치,병여림상진단유흔호적부합솔.결론 BA88166주여기타XHFV BA66019、BA8402적NP기인재진화상관계밀절,종합M기인적서렬분석결과,인원분리주BA88166가능시래자비적BA8402변이주.표체우세균중적핵단백가작위안전적진단성항원용우림상검측급류행병학조사,소건립적방법준학、특이、간편、쾌속.