CAJ | 학술논문

为了建立一种快速、灵敏、特异的能够同时检测猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒的多重荧光PCR方法。根据GenBank中公布的猪瘟病毒基因序列，设计一套特异性的引物和探针，对猪瘟病料提取RNA，经RT—PCR扩增后将产物回收，克隆至pMDl8-T构建pMDl8-T—CSFV阳性质粒；非洲猪瘟的目的片段序列采用化学合成，构建pMDl8-T—ASFV阳性质粒。以两种阳性质粒为模板时建立的多重荧光PCR方法做特异性、灵敏度和重复性试验，结果表明该方法可以将猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒同口蹄疫病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪水泡病病毒、猪圆环病毒2型区分开，灵敏度可以达到10拷贝的数量级．而且方法稳定。对2份已知猪瘟阳性血清样品和120份猪内脏、猪鼻腔拭子及血清样品检测后．发现对已知阳性样品的检测结果符合预期目标。未知样品检出猪瘟病毒3份阳性，未检出非洲猪瘟病毒阳性。
위료건립일충쾌속、령민、특이적능구동시검측저온병독화비주저온병독적다중형광PCR방법。근거GenBank중공포적저온병독기인서렬，설계일투특이성적인물화탐침，대저온병료제취RNA，경RT—PCR확증후장산물회수，극륭지pMDl8-T구건pMDl8-T—CSFV양성질립；비주저온적목적편단서렬채용화학합성，구건pMDl8-T—ASFV양성질립。이량충양성질립위모판시건립적다중형광PCR방법주특이성、령민도화중복성시험，결과표명해방법가이장저온병독화비주저온병독동구제역병독、저전염성위장염병독、저번식여호흡종합정병독、저수포병병독、저원배병독2형구분개，령민도가이체도10고패적수량급．이차방법은정。대2빈이지저온양성혈청양품화120빈저내장、저비강식자급혈청양품검측후．발현대이지양성양품적검측결과부합예기목표。미지양품검출저온병독3빈양성，미검출비주저온병독양성。