重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2011年
31期
3124-3126
,共3页
周鹤峰%邵敏%姬可平%葛正龙
週鶴峰%邵敏%姬可平%葛正龍
주학봉%소민%희가평%갈정룡
人单链白细胞介素12%大肠杆菌%生物学活性%表达
人單鏈白細胞介素12%大腸桿菌%生物學活性%錶達
인단련백세포개소12%대장간균%생물학활성%표체
目的 构建含人单链白细胞介素12(hscIL-12)基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达具有活性的hscIL-12.方法 PCR法从质粒pCA13- hscIL-12中扩增hscIL-12基因,经酶切、连接构建原核表达载体pET28a(+)-hscIL-12,转入到大肠杆菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,收集菌液进行蛋白质印迹分析,经镍柱亲和层析(Ni2+-NTA)纯化,体外增殖实验检测其生物学活性.结果 PCR扩增、双酶切及DNA序列测定证实pET28a(+)载体上成功插入了hscIL-12基因片段.表达产物经SDS-PAGE电泳分析,证明其相对分子质量为70×103;蛋白质印记表明重组蛋白具有hscIL-12抗原活性;表达产物纯化、复性后进行体外生物学活性实验表明,该重组蛋白能刺激外周血单核细胞(PBMC)产生IFN-γ.结论 pET28a(+)-hscIL-12原核表达载体的构建和重组hscIL-12蛋白的制备为进一步研究hscIL-12生物学功能和临床应用奠定了基础.
目的 構建含人單鏈白細胞介素12(hscIL-12)基因的原覈錶達載體,在大腸桿菌中錶達具有活性的hscIL-12.方法 PCR法從質粒pCA13- hscIL-12中擴增hscIL-12基因,經酶切、連接構建原覈錶達載體pET28a(+)-hscIL-12,轉入到大腸桿菌BL21(DE3)中,用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達,收集菌液進行蛋白質印跡分析,經鎳柱親和層析(Ni2+-NTA)純化,體外增殖實驗檢測其生物學活性.結果 PCR擴增、雙酶切及DNA序列測定證實pET28a(+)載體上成功插入瞭hscIL-12基因片段.錶達產物經SDS-PAGE電泳分析,證明其相對分子質量為70×103;蛋白質印記錶明重組蛋白具有hscIL-12抗原活性;錶達產物純化、複性後進行體外生物學活性實驗錶明,該重組蛋白能刺激外週血單覈細胞(PBMC)產生IFN-γ.結論 pET28a(+)-hscIL-12原覈錶達載體的構建和重組hscIL-12蛋白的製備為進一步研究hscIL-12生物學功能和臨床應用奠定瞭基礎.
목적 구건함인단련백세포개소12(hscIL-12)기인적원핵표체재체,재대장간균중표체구유활성적hscIL-12.방법 PCR법종질립pCA13- hscIL-12중확증hscIL-12기인,경매절、련접구건원핵표체재체pET28a(+)-hscIL-12,전입도대장간균BL21(DE3)중,용이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체,수집균액진행단백질인적분석,경얼주친화층석(Ni2+-NTA)순화,체외증식실험검측기생물학활성.결과 PCR확증、쌍매절급DNA서렬측정증실pET28a(+)재체상성공삽입료hscIL-12기인편단.표체산물경SDS-PAGE전영분석,증명기상대분자질량위70×103;단백질인기표명중조단백구유hscIL-12항원활성;표체산물순화、복성후진행체외생물학활성실험표명,해중조단백능자격외주혈단핵세포(PBMC)산생IFN-γ.결론 pET28a(+)-hscIL-12원핵표체재체적구건화중조hscIL-12단백적제비위진일보연구hscIL-12생물학공능화림상응용전정료기출.
