中国老年学杂志
中國老年學雜誌
중국노년학잡지
CHINESE JOURNAL OF GERONTOLOGY
2011年
10期
1806-1808
,共3页
HIF-1α%重组质粒%构建%鉴定
HIF-1α%重組質粒%構建%鑒定
HIF-1α%중조질립%구건%감정
目的 探讨HIF-1 α与前列腺癌发病机制之间相关性提供研究工具.方法 采用Trizol法裂解细胞,提取HIF-1 α且以该RNA为模板逆转录为cDNA,然后行PCB处理扩增HIF-1 α基因功能片段区域,克隆至真核表达载体pcDNA3.1上,转化至大肠杆菌DH-5 α,小提质粒,酶切凝胶电泳鉴定,序列测定,经鉴定为正确序列后中抽质粒,采用Fugene试剂转染至前列腺癌细胞PC-3,经G418筛选,建立稳定表达HIF-1 α的前列腺癌细胞系pcDNA3-1-HIF-1 α-PC-3,采用Western印迹鉴定重组质粒的表达.结果 PCR扩增基因片段大小为2.89 kb,克隆至真核载体pcDNA3.1,酶切凝胶电泳可见两个条带,大小大约为5.3 kb和2.89 kb,与预期的大小相符合,序列测定与Cenbank公布的一致,Western印迹验证其在细胞内能表达.结论 重组质粒pcDNA3.1-HIF-1 α能够在前列腺癌PC-3表达,构建成功,为研究HW-1α与前列腺癌提供了一个工具.
目的 探討HIF-1 α與前列腺癌髮病機製之間相關性提供研究工具.方法 採用Trizol法裂解細胞,提取HIF-1 α且以該RNA為模闆逆轉錄為cDNA,然後行PCB處理擴增HIF-1 α基因功能片段區域,剋隆至真覈錶達載體pcDNA3.1上,轉化至大腸桿菌DH-5 α,小提質粒,酶切凝膠電泳鑒定,序列測定,經鑒定為正確序列後中抽質粒,採用Fugene試劑轉染至前列腺癌細胞PC-3,經G418篩選,建立穩定錶達HIF-1 α的前列腺癌細胞繫pcDNA3-1-HIF-1 α-PC-3,採用Western印跡鑒定重組質粒的錶達.結果 PCR擴增基因片段大小為2.89 kb,剋隆至真覈載體pcDNA3.1,酶切凝膠電泳可見兩箇條帶,大小大約為5.3 kb和2.89 kb,與預期的大小相符閤,序列測定與Cenbank公佈的一緻,Western印跡驗證其在細胞內能錶達.結論 重組質粒pcDNA3.1-HIF-1 α能夠在前列腺癌PC-3錶達,構建成功,為研究HW-1α與前列腺癌提供瞭一箇工具.
목적 탐토HIF-1 α여전렬선암발병궤제지간상관성제공연구공구.방법 채용Trizol법렬해세포,제취HIF-1 α차이해RNA위모판역전록위cDNA,연후행PCB처리확증HIF-1 α기인공능편단구역,극륭지진핵표체재체pcDNA3.1상,전화지대장간균DH-5 α,소제질립,매절응효전영감정,서렬측정,경감정위정학서렬후중추질립,채용Fugene시제전염지전렬선암세포PC-3,경G418사선,건립은정표체HIF-1 α적전렬선암세포계pcDNA3-1-HIF-1 α-PC-3,채용Western인적감정중조질립적표체.결과 PCR확증기인편단대소위2.89 kb,극륭지진핵재체pcDNA3.1,매절응효전영가견량개조대,대소대약위5.3 kb화2.89 kb,여예기적대소상부합,서렬측정여Cenbank공포적일치,Western인적험증기재세포내능표체.결론 중조질립pcDNA3.1-HIF-1 α능구재전렬선암PC-3표체,구건성공,위연구HW-1α여전렬선암제공료일개공구.
