CAJ | 학술논문

目的对比在常规1640培养基中和在模拟宿主生理环境的培养液的刺激下旋毛虫肌幼虫排泄分泌(excretory-secretory,ES)抗原产量及成分的变化,同时观察在感染初期ES抗原的不同组分在小鼠体内诱导产生主要抗体的时间,以寻找获得更高产量的肌幼虫ES抗原的制备方法 .方法在虫数、培养液体积、培养时间、温度、ES抗原体积浓缩倍数等条件相同的情况下,按培养液中小鼠血清超滤液(简称血超)、还原型谷胱甘肽(简称谷胱甘肽)和胆汁粉的不同组合分组, 分别培养肌幼虫并收集ES抗原,再以相同上样体积作SDS-PAGE电泳,Odyssey双色红外激光成像系统扫描凝胶并测定条带信号强度进行定量比较.用Western blotting对比观察不同组ES抗原的活性及成分变化.以旋毛虫人工感染小鼠不同时期收集的血清(感染后15、18、20、21、22、24、27、30、40、50 d)作为一抗进行Western blotting,观察ES抗原主要成分在小鼠体内产生抗体的先后顺序.结果 SDS-PAGE电泳凝胶定量分析结果显示,血超+谷胱甘肽组、胆汁组和胆汁+血超组的抗原产量明显高于1640培养基组,其中胆汁+血超组的抗原产量最高.Western blotting结果显示,各组抗原均能被感染血清(感染后40 d)识别产生多个条带,其中血超+谷胱甘肽组的条带中相对分子质量约为87 000的条带荧光信号明显强于其他组;感染初期ES抗原不同组分在小鼠体内产生抗体的先后顺序为:45 000、53 000、41 000,其抗体可被检测到的最早时间分别为感染后15、21、24 d.结论培养液中添加胆汁粉可大大提高旋毛虫肌幼虫ES抗原产量,胆汁粉与血超共用后ES抗原的增产效果更佳;感染初期肌幼虫ES抗原的不同组分诱导小鼠产生抗体的时间不同.此研究将为改进ES抗原制备方法 ,寻找旋毛虫病早期诊断抗原提供实验依据.
목적 대비재상규1640배양기중화재모의숙주생리배경적배양액적자격하선모충기유충배설분비(excretory-secretory,ES)항원산량급성분적변화,동시관찰재감염초기ES항원적불동조분재소서체내유도산생주요항체적시간,이심조획득경고산량적기유충ES항원적제비방법 .방법 재충수、배양액체적、배양시간、온도、ES항원체적농축배수등조건상동적정황하,안배양액중소서혈청초려액(간칭혈초)、환원형곡광감태(간칭곡광감태)화담즙분적불동조합분조, 분별배양기유충병수집ES항원,재이상동상양체적작SDS-PAGE전영,Odyssey쌍색홍외격광성상계통소묘응효병측정조대신호강도진행정량비교.용Western blotting대비관찰불동조ES항원적활성급성분변화.이선모충인공감염소서불동시기수집적혈청(감염후15、18、20、21、22、24、27、30、40、50 d)작위일항진행Western blotting,관찰ES항원주요성분재소서체내산생항체적선후순서.결과 SDS-PAGE전영응효정량분석결과 현시,혈초+곡광감태조、담즙조화담즙+혈초조적항원산량명현고우1640배양기조,기중담즙+혈초조적항원산량최고.Western blotting결과 현시,각조항원균능피감염혈청(감염후40 d)식별산생다개조대,기중혈초+곡광감태조적조대중상대분자질량약위87 000적조대형광신호명현강우기타조;감염초기ES항원불동조분재소서체내산생항체적선후순서위:45 000、53 000、41 000,기항체가피검측도적최조시간분별위감염후15、21、24 d.결론 배양액중첨가담즙분가대대제고선모충기유충ES항원산량,담즙분여혈초공용후ES항원적증산효과경가;감염초기기유충ES항원적불동조분유도소서산생항체적시간불동.차연구장위개진ES항원제비방법 ,심조선모충병조기진단항원제공실험의거.