生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2010年
8期
110-115
,共6页
刘金亮%王凤婷%侯春喜%魏毅%张世宏%潘洪玉
劉金亮%王鳳婷%侯春喜%魏毅%張世宏%潘洪玉
류금량%왕봉정%후춘희%위의%장세굉%반홍옥
黄瓜花叶病毒%辣椒%CP基因%序列分析%原核表达%抗血清制备
黃瓜花葉病毒%辣椒%CP基因%序列分析%原覈錶達%抗血清製備
황과화협병독%랄초%CP기인%서렬분석%원핵표체%항혈청제비
从吉林长春感病辣椒上获得一黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)分离物(CMV-CC),根据GenBank中已登录的CMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因核苷酸序列设计简并引物,通过RT-PCR的方法克隆到了长度为657 bp的目的片段.序列分析表明,CMV-CC与CMVI组各分离物核苷酸同源性为93.2%-97.9%.根据完整CP 基因核苷酸序列构建的系统进化树显示:38个CMV分离物可分为3个组,CMV-CC属于CMV的IB亚组.将CMV-CC CP基因与原核表达载体pET-22b(+)连接,在大肠杆菌BL21 (DE3)诱导表达出分子量约27 kD的融合蛋白.表达的融合蛋白经树脂纯化后免疫家兔制备了抗血清.用间接ELISA测定抗血清效价为1/4 096.Western blotting分析表明制备的抗血清对CP有高度特异性,为准确、快速地检测CMV奠定了基础.
從吉林長春感病辣椒上穫得一黃瓜花葉病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)分離物(CMV-CC),根據GenBank中已登錄的CMV外殼蛋白(coat protein,CP)基因覈苷痠序列設計簡併引物,通過RT-PCR的方法剋隆到瞭長度為657 bp的目的片段.序列分析錶明,CMV-CC與CMVI組各分離物覈苷痠同源性為93.2%-97.9%.根據完整CP 基因覈苷痠序列構建的繫統進化樹顯示:38箇CMV分離物可分為3箇組,CMV-CC屬于CMV的IB亞組.將CMV-CC CP基因與原覈錶達載體pET-22b(+)連接,在大腸桿菌BL21 (DE3)誘導錶達齣分子量約27 kD的融閤蛋白.錶達的融閤蛋白經樹脂純化後免疫傢兔製備瞭抗血清.用間接ELISA測定抗血清效價為1/4 096.Western blotting分析錶明製備的抗血清對CP有高度特異性,為準確、快速地檢測CMV奠定瞭基礎.
종길림장춘감병랄초상획득일황과화협병독(Cucumber mosaic virus,CMV)분리물(CMV-CC),근거GenBank중이등록적CMV외각단백(coat protein,CP)기인핵감산서렬설계간병인물,통과RT-PCR적방법극륭도료장도위657 bp적목적편단.서렬분석표명,CMV-CC여CMVI조각분리물핵감산동원성위93.2%-97.9%.근거완정CP 기인핵감산서렬구건적계통진화수현시:38개CMV분리물가분위3개조,CMV-CC속우CMV적IB아조.장CMV-CC CP기인여원핵표체재체pET-22b(+)련접,재대장간균BL21 (DE3)유도표체출분자량약27 kD적융합단백.표체적융합단백경수지순화후면역가토제비료항혈청.용간접ELISA측정항혈청효개위1/4 096.Western blotting분석표명제비적항혈청대CP유고도특이성,위준학、쾌속지검측CMV전정료기출.
