南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2010年
6期
1339-1342
,共4页
南清振%高蕾%肖冰%张振书%姜泊
南清振%高蕾%肖冰%張振書%薑泊
남청진%고뢰%초빙%장진서%강박
Rac1%RNA干扰%软琼脂单克隆形成%SW480细胞
Rac1%RNA榦擾%軟瓊脂單剋隆形成%SW480細胞
Rac1%RNA간우%연경지단극륭형성%SW480세포
目的 构建针对Rac1的siRNA表达载体,并观察其对大肠癌SW480细胞中Rac1蛋白表达的抑制作用,同时研究Rac1蛋白表达抑制后细胞在体外软琼脂糖中单克隆形成情况.方法 化学合成用于产生针对Rac1的发卡状RNA的寡核苷酸,各64个碱基,退火后插入线性化的pSUPER载体的H1启动子下游.重组载体经限制性酶切和测序.把构建的载体转染大肠癌细胞系SW480,观察其对Rac1蛋白表达的干扰作用,软琼脂糖体外克隆形成实验研究SW480抑制Rac1蛋白表达后的效果.结果 限制性酶切和序列测定表明成功构建了可以表达针对Rac1的发卡状RNA表达载体,该载体表达的发卡状RNA在SW480细胞中能够有效的下调Racl蛋白的表达.体外软琼脂单克隆形成实验显示,抑制Rac1蛋白表达后,形成的单克隆数目明显减少,直径也明显缩小.结论 成功构建了针对Rac1的发卡状RNA表达载体;体外软琼脂单克隆实验表明Rac1蛋白对SW480细胞克隆形成数目及大小有明显影响,说明Rael蛋白在大肠癌的体外生长过程中具有重要作用.
目的 構建針對Rac1的siRNA錶達載體,併觀察其對大腸癌SW480細胞中Rac1蛋白錶達的抑製作用,同時研究Rac1蛋白錶達抑製後細胞在體外軟瓊脂糖中單剋隆形成情況.方法 化學閤成用于產生針對Rac1的髮卡狀RNA的寡覈苷痠,各64箇堿基,退火後插入線性化的pSUPER載體的H1啟動子下遊.重組載體經限製性酶切和測序.把構建的載體轉染大腸癌細胞繫SW480,觀察其對Rac1蛋白錶達的榦擾作用,軟瓊脂糖體外剋隆形成實驗研究SW480抑製Rac1蛋白錶達後的效果.結果 限製性酶切和序列測定錶明成功構建瞭可以錶達針對Rac1的髮卡狀RNA錶達載體,該載體錶達的髮卡狀RNA在SW480細胞中能夠有效的下調Racl蛋白的錶達.體外軟瓊脂單剋隆形成實驗顯示,抑製Rac1蛋白錶達後,形成的單剋隆數目明顯減少,直徑也明顯縮小.結論 成功構建瞭針對Rac1的髮卡狀RNA錶達載體;體外軟瓊脂單剋隆實驗錶明Rac1蛋白對SW480細胞剋隆形成數目及大小有明顯影響,說明Rael蛋白在大腸癌的體外生長過程中具有重要作用.
목적 구건침대Rac1적siRNA표체재체,병관찰기대대장암SW480세포중Rac1단백표체적억제작용,동시연구Rac1단백표체억제후세포재체외연경지당중단극륭형성정황.방법 화학합성용우산생침대Rac1적발잡상RNA적과핵감산,각64개감기,퇴화후삽입선성화적pSUPER재체적H1계동자하유.중조재체경한제성매절화측서.파구건적재체전염대장암세포계SW480,관찰기대Rac1단백표체적간우작용,연경지당체외극륭형성실험연구SW480억제Rac1단백표체후적효과.결과 한제성매절화서렬측정표명성공구건료가이표체침대Rac1적발잡상RNA표체재체,해재체표체적발잡상RNA재SW480세포중능구유효적하조Racl단백적표체.체외연경지단극륭형성실험현시,억제Rac1단백표체후,형성적단극륭수목명현감소,직경야명현축소.결론 성공구건료침대Rac1적발잡상RNA표체재체;체외연경지단극륭실험표명Rac1단백대SW480세포극륭형성수목급대소유명현영향,설명Rael단백재대장암적체외생장과정중구유중요작용.
