兰州大学学报(医学版)
蘭州大學學報(醫學版)
란주대학학보(의학판)
JOURNAL OF LANZHOU UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2010年
1期
44-48
,共5页
吴建军%闵现华%岳嘉%刘喜平%韩跃武
吳建軍%閔現華%嶽嘉%劉喜平%韓躍武
오건군%민현화%악가%류희평%한약무
牛乳铁蛋白素基因%牛乳铁蛋白素突变基因%融合表达%大肠埃希菌
牛乳鐵蛋白素基因%牛乳鐵蛋白素突變基因%融閤錶達%大腸埃希菌
우유철단백소기인%우유철단백소돌변기인%융합표체%대장애희균
目的 构建牛乳铁蛋白素基因(LfcinB)及牛乳铁蛋白素突变基因(mLfcinB)的表达载体,建立在大肠埃希菌中融合表达的方法.方法依据大肠埃希菌偏爱密码子设计LfcinB和mLfcinB,进行克隆扩增并测序,构建LfcinB和mLfcinB的融合表达载体并转化入大肠埃希菌,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,产物经谷胱甘肽-琼脂糖凝胶法纯化.结果成功构建了融合表达载体pGEX-4T-1-LfcinB和pGEX-4T-1-mLfcinB,表达载体转化大肠埃希菌BL21,经IPTG诱导3h后LfcinB和mLfcinB融合蛋白表达率约为30%,洗脱纯化后产物约为60%.聚丙烯酰氨凝胶电泳显示融合蛋白为29 kDa,主要以包涵体形式存在,谷胱甘肽-琼脂糖凝胶纯化后得到3.1 kDa的目的 蛋白.结论 LfcinB及其突变基因在大肠埃希菌中的融合表达可提高LfcinB的表达率.
目的 構建牛乳鐵蛋白素基因(LfcinB)及牛乳鐵蛋白素突變基因(mLfcinB)的錶達載體,建立在大腸埃希菌中融閤錶達的方法.方法依據大腸埃希菌偏愛密碼子設計LfcinB和mLfcinB,進行剋隆擴增併測序,構建LfcinB和mLfcinB的融閤錶達載體併轉化入大腸埃希菌,經異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達,產物經穀胱甘肽-瓊脂糖凝膠法純化.結果成功構建瞭融閤錶達載體pGEX-4T-1-LfcinB和pGEX-4T-1-mLfcinB,錶達載體轉化大腸埃希菌BL21,經IPTG誘導3h後LfcinB和mLfcinB融閤蛋白錶達率約為30%,洗脫純化後產物約為60%.聚丙烯酰氨凝膠電泳顯示融閤蛋白為29 kDa,主要以包涵體形式存在,穀胱甘肽-瓊脂糖凝膠純化後得到3.1 kDa的目的 蛋白.結論 LfcinB及其突變基因在大腸埃希菌中的融閤錶達可提高LfcinB的錶達率.
목적 구건우유철단백소기인(LfcinB)급우유철단백소돌변기인(mLfcinB)적표체재체,건립재대장애희균중융합표체적방법.방법의거대장애희균편애밀마자설계LfcinB화mLfcinB,진행극륭확증병측서,구건LfcinB화mLfcinB적융합표체재체병전화입대장애희균,경이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체,산물경곡광감태-경지당응효법순화.결과성공구건료융합표체재체pGEX-4T-1-LfcinB화pGEX-4T-1-mLfcinB,표체재체전화대장애희균BL21,경IPTG유도3h후LfcinB화mLfcinB융합단백표체솔약위30%,세탈순화후산물약위60%.취병희선안응효전영현시융합단백위29 kDa,주요이포함체형식존재,곡광감태-경지당응효순화후득도3.1 kDa적목적 단백.결론 LfcinB급기돌변기인재대장애희균중적융합표체가제고LfcinB적표체솔.
