光学学报
光學學報
광학학보
ACTA OPTICA SINICA
2009年
6期
1605-1608
,共4页
陈冠楠%黄祖芳%陈荣%林居强%杨坤涛%李钻芳
陳冠楠%黃祖芳%陳榮%林居彊%楊坤濤%李鑽芳
진관남%황조방%진영%림거강%양곤도%리찬방
医用光学与生物技术%双光子激发荧光%5-ALA%PpⅨ%DHL细胞%细胞定位%定量分析
醫用光學與生物技術%雙光子激髮熒光%5-ALA%PpⅨ%DHL細胞%細胞定位%定量分析
의용광학여생물기술%쌍광자격발형광%5-ALA%PpⅨ%DHL세포%세포정위%정량분석
采用共聚焦显微技术中的双光子激发荧光方法获得DHL细胞中5-氨基酮戊酸(5-ALA)代谢原卟啉Ⅸ(PpⅨ)荧光图像.结合Rhodamine123、DioC6(3)和LysoTraeker Green三种细胞器荧光探针的使用,采用双标的标记方法观察DHL细胞中5-ALA代谢PpⅨ在DHL细胞的定位分布,进而利用Matlab软件对获得的定位的融合荧光图像进行相关系数计算.通过Matlab软件编写程序对获得的定位图像进行边缘检测、提取和分割等处理,计算获得的线粒体相关系数r=0.564;内质网相关系数r=0.465;溶酶体相关系数r=0.366;可以认为5=ALA代谢PpⅨ在线粒体、内质网、溶酶体三种细胞器区域均有分布,但PpⅨ在不同细胞器聚集程度存在比较大的差异,经过3 h的孵育代谢PpⅨ主要积聚于线粒体,而溶酶体中积聚的最少.研究表明双光子激发荧光可成为定性或定量研究DHL细胞中5-ALA代谢PpⅨ以及PpⅨ在细胞定位的重要方法.
採用共聚焦顯微技術中的雙光子激髮熒光方法穫得DHL細胞中5-氨基酮戊痠(5-ALA)代謝原卟啉Ⅸ(PpⅨ)熒光圖像.結閤Rhodamine123、DioC6(3)和LysoTraeker Green三種細胞器熒光探針的使用,採用雙標的標記方法觀察DHL細胞中5-ALA代謝PpⅨ在DHL細胞的定位分佈,進而利用Matlab軟件對穫得的定位的融閤熒光圖像進行相關繫數計算.通過Matlab軟件編寫程序對穫得的定位圖像進行邊緣檢測、提取和分割等處理,計算穫得的線粒體相關繫數r=0.564;內質網相關繫數r=0.465;溶酶體相關繫數r=0.366;可以認為5=ALA代謝PpⅨ在線粒體、內質網、溶酶體三種細胞器區域均有分佈,但PpⅨ在不同細胞器聚集程度存在比較大的差異,經過3 h的孵育代謝PpⅨ主要積聚于線粒體,而溶酶體中積聚的最少.研究錶明雙光子激髮熒光可成為定性或定量研究DHL細胞中5-ALA代謝PpⅨ以及PpⅨ在細胞定位的重要方法.
채용공취초현미기술중적쌍광자격발형광방법획득DHL세포중5-안기동무산(5-ALA)대사원계람Ⅸ(PpⅨ)형광도상.결합Rhodamine123、DioC6(3)화LysoTraeker Green삼충세포기형광탐침적사용,채용쌍표적표기방법관찰DHL세포중5-ALA대사PpⅨ재DHL세포적정위분포,진이이용Matlab연건대획득적정위적융합형광도상진행상관계수계산.통과Matlab연건편사정서대획득적정위도상진행변연검측、제취화분할등처리,계산획득적선립체상관계수r=0.564;내질망상관계수r=0.465;용매체상관계수r=0.366;가이인위5=ALA대사PpⅨ재선립체、내질망、용매체삼충세포기구역균유분포,단PpⅨ재불동세포기취집정도존재비교대적차이,경과3 h적부육대사PpⅨ주요적취우선립체,이용매체중적취적최소.연구표명쌍광자격발형광가성위정성혹정량연구DHL세포중5-ALA대사PpⅨ이급PpⅨ재세포정위적중요방법.
