中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2008年
12期
1145-1148
,共4页
李瑾%黄炳亮%魏庆宽%肖婷%崔勇%刘克义
李瑾%黃炳亮%魏慶寬%肖婷%崔勇%劉剋義
리근%황병량%위경관%초정%최용%류극의
微小隐孢子虫%Cp23基因%重组卡介苗%构建%鉴定
微小隱孢子蟲%Cp23基因%重組卡介苗%構建%鑒定
미소은포자충%Cp23기인%중조잡개묘%구건%감정
目的 构建和鉴定微小隐孢子虫Cp23基因卡介苗重组疫苗. 方法 用微小隐孢子虫感染免疫抑制BALB/c小鼠,用蔗糖密度梯度离心法纯化其粪便中的卵囊,酚-氯仿法提取微小隐孢子虫的基因组DNA,PCR扩增Cp23基因片段,然后将其克隆TA载体;通过酶切、测序鉴定后,将Cp23基因片段用限制性内切酶切下克隆至大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV262结核杆菌热休克蛋白(HSP)启动子下游,构建重组质粒pMV262-Cp-23,用电穿孔将该质粒导入野生卡介苗(BCG-WT)构建微小隐孢子虫Cp23基因卡介苗重组疫苗.结果 扩增出约360bp的微小隐孢子虫Cp23基因片段并成功构建pMV262-Cp23质粒,通过PCR扩增和提取质粒、酶切表明质粒正确导入BCG-WT中.结论 成功构建微小隐孢子虫Cp23基因卡介苗重组疫苗.
目的 構建和鑒定微小隱孢子蟲Cp23基因卡介苗重組疫苗. 方法 用微小隱孢子蟲感染免疫抑製BALB/c小鼠,用蔗糖密度梯度離心法純化其糞便中的卵囊,酚-氯倣法提取微小隱孢子蟲的基因組DNA,PCR擴增Cp23基因片段,然後將其剋隆TA載體;通過酶切、測序鑒定後,將Cp23基因片段用限製性內切酶切下剋隆至大腸埃希菌-分枝桿菌穿梭錶達載體pMV262結覈桿菌熱休剋蛋白(HSP)啟動子下遊,構建重組質粒pMV262-Cp-23,用電穿孔將該質粒導入野生卡介苗(BCG-WT)構建微小隱孢子蟲Cp23基因卡介苗重組疫苗.結果 擴增齣約360bp的微小隱孢子蟲Cp23基因片段併成功構建pMV262-Cp23質粒,通過PCR擴增和提取質粒、酶切錶明質粒正確導入BCG-WT中.結論 成功構建微小隱孢子蟲Cp23基因卡介苗重組疫苗.
목적 구건화감정미소은포자충Cp23기인잡개묘중조역묘. 방법 용미소은포자충감염면역억제BALB/c소서,용자당밀도제도리심법순화기분편중적란낭,분-록방법제취미소은포자충적기인조DNA,PCR확증Cp23기인편단,연후장기극륭TA재체;통과매절、측서감정후,장Cp23기인편단용한제성내절매절하극륭지대장애희균-분지간균천사표체재체pMV262결핵간균열휴극단백(HSP)계동자하유,구건중조질립pMV262-Cp-23,용전천공장해질립도입야생잡개묘(BCG-WT)구건미소은포자충Cp23기인잡개묘중조역묘.결과 확증출약360bp적미소은포자충Cp23기인편단병성공구건pMV262-Cp23질립,통과PCR확증화제취질립、매절표명질립정학도입BCG-WT중.결론 성공구건미소은포자충Cp23기인잡개묘중조역묘.
