实验动物与比较医学
實驗動物與比較醫學
실험동물여비교의학
LABORATORY ANIMAL AND COMPARATIVE MEDICINE
2008年
3期
138-143
,共6页
周密%贾晓峰%史庭燕%王健%袁瑶%施惠娟
週密%賈曉峰%史庭燕%王健%袁瑤%施惠娟
주밀%가효봉%사정연%왕건%원요%시혜연
雄性生殖细胞载体法%特异性基因rsp3111%体外受精
雄性生殖細胞載體法%特異性基因rsp3111%體外受精
웅성생식세포재체법%특이성기인rsp3111%체외수정
目的 构建目的 基因rsp3111与荧光蛋白融合表达的质粒,并且实现目的 基因在体外受精胚胎及在体附睾成熟精子中表达.为进一步通过精原千细胞体内转染途径建立rsp3111转基因小鼠奠定基础.方法 将rsp311l基因以XholI和BamHI酶切后插入经同样酶切处理的真核细胞表达质粒pDsRed-Monomer-N1中,重组质粒为pDsRed-Monomer-N1-rsP3111.采用共培养和脂质体介导方法将ICR小鼠精子与pDsRed-Monomer-N1-rsP3111质粒共孵育,再与成熟的卵母细胞体外受精;或用脂质体介导睾丸直接注射法,将pDsRed-Monomer-N1-rSP3111导入小鼠睾丸中,通过PCR及荧光显微镜观察体外受精后的受精卵及体内睾丸转染rsp3111基因后附睾精子中是否有外源rsp3111基因的表达.结果 PCR结果表明,rsp3111基因成功地转入了附睾精子及受精卵中.荧光检测结果表明,目的 基因rsp3111在体外受精胚胎及睾丸的曲细精管中均有表达.结论 通过雄性生殖细胞载体法实现了大鼠配子特异性蛋白rsP3111在小鼠受精卵及睾丸、附睾精子中的表达;为进一步通过精原干细胞体内转染途径建立rsp3111转基因小鼠奠定了基础.
目的 構建目的 基因rsp3111與熒光蛋白融閤錶達的質粒,併且實現目的 基因在體外受精胚胎及在體附睪成熟精子中錶達.為進一步通過精原韆細胞體內轉染途徑建立rsp3111轉基因小鼠奠定基礎.方法 將rsp311l基因以XholI和BamHI酶切後插入經同樣酶切處理的真覈細胞錶達質粒pDsRed-Monomer-N1中,重組質粒為pDsRed-Monomer-N1-rsP3111.採用共培養和脂質體介導方法將ICR小鼠精子與pDsRed-Monomer-N1-rsP3111質粒共孵育,再與成熟的卵母細胞體外受精;或用脂質體介導睪汍直接註射法,將pDsRed-Monomer-N1-rSP3111導入小鼠睪汍中,通過PCR及熒光顯微鏡觀察體外受精後的受精卵及體內睪汍轉染rsp3111基因後附睪精子中是否有外源rsp3111基因的錶達.結果 PCR結果錶明,rsp3111基因成功地轉入瞭附睪精子及受精卵中.熒光檢測結果錶明,目的 基因rsp3111在體外受精胚胎及睪汍的麯細精管中均有錶達.結論 通過雄性生殖細胞載體法實現瞭大鼠配子特異性蛋白rsP3111在小鼠受精卵及睪汍、附睪精子中的錶達;為進一步通過精原榦細胞體內轉染途徑建立rsp3111轉基因小鼠奠定瞭基礎.
목적 구건목적 기인rsp3111여형광단백융합표체적질립,병차실현목적 기인재체외수정배태급재체부고성숙정자중표체.위진일보통과정원천세포체내전염도경건립rsp3111전기인소서전정기출.방법 장rsp311l기인이XholI화BamHI매절후삽입경동양매절처리적진핵세포표체질립pDsRed-Monomer-N1중,중조질립위pDsRed-Monomer-N1-rsP3111.채용공배양화지질체개도방법장ICR소서정자여pDsRed-Monomer-N1-rsP3111질립공부육,재여성숙적란모세포체외수정;혹용지질체개도고환직접주사법,장pDsRed-Monomer-N1-rSP3111도입소서고환중,통과PCR급형광현미경관찰체외수정후적수정란급체내고환전염rsp3111기인후부고정자중시부유외원rsp3111기인적표체.결과 PCR결과표명,rsp3111기인성공지전입료부고정자급수정란중.형광검측결과표명,목적 기인rsp3111재체외수정배태급고환적곡세정관중균유표체.결론 통과웅성생식세포재체법실현료대서배자특이성단백rsP3111재소서수정란급고환、부고정자중적표체;위진일보통과정원간세포체내전염도경건립rsp3111전기인소서전정료기출.
