热带医学杂志
熱帶醫學雜誌
열대의학잡지
JOURNAL OF TROPICAL MEDICINE
2008年
1期
23-27
,共5页
甄茵%张仁利%耿艺介%高世同%胡章立
甄茵%張仁利%耿藝介%高世同%鬍章立
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金黄色葡萄球菌肠毒素D%重组SED蛋白
金黃色葡萄毬菌腸毒素D%重組SED蛋白
금황색포도구균장독소D%중조SED단백
目的 克隆金黄色葡萄球菌肠毒素D基因(entD),表达和纯化其重组蛋白(rSED),以进一步制备抗rSED抗体,研制SED金标免疫快速检测试纸条.方法 利用PCR技术,从野生型金黄色葡萄球菌中筛选产肠毒素D金黄色葡萄球菌标准株,扩增entD基因,克隆至pGEM-T Easy载体,亚克隆至原核表达载体pET28a,重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达蛋白,Ni-NTA亲和层析纯化蛋白,免疫印迹检测抗原活性.结果 分离获得1株产肠毒素D金黄色葡葡球菌标准株,成功克隆entD序列,测序表明该基因共684 bp,与其他entD序列(GenBank登陆号:M28521)具有99%的同源性.rSED蛋白在大肠杆菌中得到高效的可溶性表达.免疫印迹结果 表明,rSED蛋白能被抗天然SED抗体识别.结论 通过基因重组技术制备的重组SED蛋白具有良好的免疫反应性.
目的 剋隆金黃色葡萄毬菌腸毒素D基因(entD),錶達和純化其重組蛋白(rSED),以進一步製備抗rSED抗體,研製SED金標免疫快速檢測試紙條.方法 利用PCR技術,從野生型金黃色葡萄毬菌中篩選產腸毒素D金黃色葡萄毬菌標準株,擴增entD基因,剋隆至pGEM-T Easy載體,亞剋隆至原覈錶達載體pET28a,重組質粒轉化到大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導錶達蛋白,Ni-NTA親和層析純化蛋白,免疫印跡檢測抗原活性.結果 分離穫得1株產腸毒素D金黃色葡葡毬菌標準株,成功剋隆entD序列,測序錶明該基因共684 bp,與其他entD序列(GenBank登陸號:M28521)具有99%的同源性.rSED蛋白在大腸桿菌中得到高效的可溶性錶達.免疫印跡結果 錶明,rSED蛋白能被抗天然SED抗體識彆.結論 通過基因重組技術製備的重組SED蛋白具有良好的免疫反應性.
목적 극륭금황색포도구균장독소D기인(entD),표체화순화기중조단백(rSED),이진일보제비항rSED항체,연제SED금표면역쾌속검측시지조.방법 이용PCR기술,종야생형금황색포도구균중사선산장독소D금황색포도구균표준주,확증entD기인,극륭지pGEM-T Easy재체,아극륭지원핵표체재체pET28a,중조질립전화도대장간균BL21(DE3),IPTG유도표체단백,Ni-NTA친화층석순화단백,면역인적검측항원활성.결과 분리획득1주산장독소D금황색포포구균표준주,성공극륭entD서렬,측서표명해기인공684 bp,여기타entD서렬(GenBank등륙호:M28521)구유99%적동원성.rSED단백재대장간균중득도고효적가용성표체.면역인적결과 표명,rSED단백능피항천연SED항체식별.결론 통과기인중조기술제비적중조SED단백구유량호적면역반응성.
