安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2007年
34期
11022-11023,11109
,共3页
郝春丽%王泽霖%王新卫%姚慧霞%周欣
郝春麗%王澤霖%王新衛%姚慧霞%週訢
학춘려%왕택림%왕신위%요혜하%주흔
传染性支气管炎病毒(IBV)%核蛋白%表达
傳染性支氣管炎病毒(IBV)%覈蛋白%錶達
전염성지기관염병독(IBV)%핵단백%표체
[目的]生产具有生物活性的、可用于临床检测的NP融合蛋白抗原,建立可用于临床检测IB抗体诊断的试剂盒.[方法]利用RT-PCR技术扩增传染性支气管炎病毒M41株的NP基因,将之克隆并重组于原核表达载体pET-28a,经PCR、酶切鉴定及序列分析构建重组表达载体pET-NP,研究NP基因在大肠杆菌中的可溶性表达.[结果]将重组载体pET-NP转化表达菌BL21,获得阳性重组菌pET-NP-BL.阳性重组子经IPTG诱导后,目的基因NP获得了高效表达.表达产物经过SDS-PAGE与Western blot检测表明,NP分子量约为49 kD,且以可溶性蛋白形式存在;表达产物可与特异性传染性支气管炎病毒抗血清发生免疫反应.表达产物可以用作检测IB抗体的抗原.[结论]该融合蛋白可用于生产检测IB的诊断试剂,生物安全性高,生产方便.但尚需建立适当的检测方法,进一步研究其实际诊断价值.同时也可以研制新型IB重组亚单位疫苗,进一步研究其刺激动物机体产生的细胞与体液免疫,深入研究新功能,筛选新的抗原表位,为生产新型IB基因工程疫苗奠定基础.
[目的]生產具有生物活性的、可用于臨床檢測的NP融閤蛋白抗原,建立可用于臨床檢測IB抗體診斷的試劑盒.[方法]利用RT-PCR技術擴增傳染性支氣管炎病毒M41株的NP基因,將之剋隆併重組于原覈錶達載體pET-28a,經PCR、酶切鑒定及序列分析構建重組錶達載體pET-NP,研究NP基因在大腸桿菌中的可溶性錶達.[結果]將重組載體pET-NP轉化錶達菌BL21,穫得暘性重組菌pET-NP-BL.暘性重組子經IPTG誘導後,目的基因NP穫得瞭高效錶達.錶達產物經過SDS-PAGE與Western blot檢測錶明,NP分子量約為49 kD,且以可溶性蛋白形式存在;錶達產物可與特異性傳染性支氣管炎病毒抗血清髮生免疫反應.錶達產物可以用作檢測IB抗體的抗原.[結論]該融閤蛋白可用于生產檢測IB的診斷試劑,生物安全性高,生產方便.但尚需建立適噹的檢測方法,進一步研究其實際診斷價值.同時也可以研製新型IB重組亞單位疫苗,進一步研究其刺激動物機體產生的細胞與體液免疫,深入研究新功能,篩選新的抗原錶位,為生產新型IB基因工程疫苗奠定基礎.
[목적]생산구유생물활성적、가용우림상검측적NP융합단백항원,건립가용우림상검측IB항체진단적시제합.[방법]이용RT-PCR기술확증전염성지기관염병독M41주적NP기인,장지극륭병중조우원핵표체재체pET-28a,경PCR、매절감정급서렬분석구건중조표체재체pET-NP,연구NP기인재대장간균중적가용성표체.[결과]장중조재체pET-NP전화표체균BL21,획득양성중조균pET-NP-BL.양성중조자경IPTG유도후,목적기인NP획득료고효표체.표체산물경과SDS-PAGE여Western blot검측표명,NP분자량약위49 kD,차이가용성단백형식존재;표체산물가여특이성전염성지기관염병독항혈청발생면역반응.표체산물가이용작검측IB항체적항원.[결론]해융합단백가용우생산검측IB적진단시제,생물안전성고,생산방편.단상수건립괄당적검측방법,진일보연구기실제진단개치.동시야가이연제신형IB중조아단위역묘,진일보연구기자격동물궤체산생적세포여체액면역,심입연구신공능,사선신적항원표위,위생산신형IB기인공정역묘전정기출.
