中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2007年
11期
1083-1087
,共5页
王君玮%王志亮%王伟伟%赵永刚%孙承英%李林%赵云玲%张维
王君瑋%王誌亮%王偉偉%趙永剛%孫承英%李林%趙雲玲%張維
왕군위%왕지량%왕위위%조영강%손승영%리림%조운령%장유
猪链球菌2型%多重荧光PCR%MRP%CPS2J
豬鏈毬菌2型%多重熒光PCR%MRP%CPS2J
저련구균2형%다중형광PCR%MRP%CPS2J
目的 建立能同时鉴定链球菌2型(S.suis 2)和确定主要毒力标志MRP的快速检测方法.方法 根据S.suis 2 CPS2J与MRP的保守序列,设计并合成了2 对引物及其相应探针.通过优化各反应物的浓度、配比和循环程序,建立能从组织中直接检测CPS2J和MRP的实时荧光PCR 方法.结果 能在3 h内对送检组织样品检测确定S.suis 2型和MRP毒力基因,最低检测菌体浓度24CFU/ml.与普通PCR相比,敏感性在检测CPS2J时比普通PCR高至少10倍以上,而在检测MRP时比其高100倍.与葡萄球菌、化脓链球菌、沙门氏菌、S.suis 1型、9型等无交叉反应.同一人在试剂放置0d、20d和60d检测,以及不同人用同一方法检测,变异系数均小于5%,差异不显著.用于检测SSsc0501攻毒后的样品,结果在心、肝、脾、肺、肾、淋巴结、脑中均检测到S.suis 2阳性,MRP阳性.而在肌肉中,S.suis 2和MRP均为阴性.结论 建立的多重荧光Real-time PCR敏感性高、特异性强,稳定性和重复性好,能用于可疑S.suis 2型组织样品的快速定型和毒力鉴定.
目的 建立能同時鑒定鏈毬菌2型(S.suis 2)和確定主要毒力標誌MRP的快速檢測方法.方法 根據S.suis 2 CPS2J與MRP的保守序列,設計併閤成瞭2 對引物及其相應探針.通過優化各反應物的濃度、配比和循環程序,建立能從組織中直接檢測CPS2J和MRP的實時熒光PCR 方法.結果 能在3 h內對送檢組織樣品檢測確定S.suis 2型和MRP毒力基因,最低檢測菌體濃度24CFU/ml.與普通PCR相比,敏感性在檢測CPS2J時比普通PCR高至少10倍以上,而在檢測MRP時比其高100倍.與葡萄毬菌、化膿鏈毬菌、沙門氏菌、S.suis 1型、9型等無交扠反應.同一人在試劑放置0d、20d和60d檢測,以及不同人用同一方法檢測,變異繫數均小于5%,差異不顯著.用于檢測SSsc0501攻毒後的樣品,結果在心、肝、脾、肺、腎、淋巴結、腦中均檢測到S.suis 2暘性,MRP暘性.而在肌肉中,S.suis 2和MRP均為陰性.結論 建立的多重熒光Real-time PCR敏感性高、特異性彊,穩定性和重複性好,能用于可疑S.suis 2型組織樣品的快速定型和毒力鑒定.
목적 건립능동시감정련구균2형(S.suis 2)화학정주요독력표지MRP적쾌속검측방법.방법 근거S.suis 2 CPS2J여MRP적보수서렬,설계병합성료2 대인물급기상응탐침.통과우화각반응물적농도、배비화순배정서,건립능종조직중직접검측CPS2J화MRP적실시형광PCR 방법.결과 능재3 h내대송검조직양품검측학정S.suis 2형화MRP독력기인,최저검측균체농도24CFU/ml.여보통PCR상비,민감성재검측CPS2J시비보통PCR고지소10배이상,이재검측MRP시비기고100배.여포도구균、화농련구균、사문씨균、S.suis 1형、9형등무교차반응.동일인재시제방치0d、20d화60d검측,이급불동인용동일방법검측,변이계수균소우5%,차이불현저.용우검측SSsc0501공독후적양품,결과재심、간、비、폐、신、림파결、뇌중균검측도S.suis 2양성,MRP양성.이재기육중,S.suis 2화MRP균위음성.결론 건립적다중형광Real-time PCR민감성고、특이성강,은정성화중복성호,능용우가의S.suis 2형조직양품적쾌속정형화독력감정.
