微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2007年
6期
973-977
,共5页
刘金林%贝为成%林荔雯%徐引弟%陈焕春%梅岭
劉金林%貝為成%林荔雯%徐引弟%陳煥春%梅嶺
류금림%패위성%림려문%서인제%진환춘%매령
胸膜肺炎放线杆菌%接合转移%负向筛选%重组菌株%构建%鉴定
胸膜肺炎放線桿菌%接閤轉移%負嚮篩選%重組菌株%構建%鑒定
흉막폐염방선간균%접합전이%부향사선%중조균주%구건%감정
通过接合转移和SacB负向筛选方法,成功构建了一株apxⅡC缺失的血清7型胸膜肺炎放线杆菌重组菌株.首先构建重组转移质粒pEHA1.将pEHA1转化供体菌大肠杆菌(E. coli β2155),并将其与野生型APP血清7型亲本菌混合培养约5h,然后涂到含氯霉素抗性的培养基培养,挑取阳性克隆,接种到无抗性液体培养基,培养后涂于含有蔗糖的的固体培养基,培养一定时间后挑取蔗糖抗性的克隆,即可得到目的突变株.通过PCR、遗传稳定性、外毒素分泌、重组位点序列分析证明重组菌构建成功.通过对重组菌生物学特性进行初步研究,表明突变株生长能力未受影响,对小鼠毒力显著降低.该突变株构建体系的建立为猪传染性胸膜肺炎减毒活疫苗的开发及对胸膜肺炎放线杆菌新基因的功能研究奠定了良好基础.
通過接閤轉移和SacB負嚮篩選方法,成功構建瞭一株apxⅡC缺失的血清7型胸膜肺炎放線桿菌重組菌株.首先構建重組轉移質粒pEHA1.將pEHA1轉化供體菌大腸桿菌(E. coli β2155),併將其與野生型APP血清7型親本菌混閤培養約5h,然後塗到含氯黴素抗性的培養基培養,挑取暘性剋隆,接種到無抗性液體培養基,培養後塗于含有蔗糖的的固體培養基,培養一定時間後挑取蔗糖抗性的剋隆,即可得到目的突變株.通過PCR、遺傳穩定性、外毒素分泌、重組位點序列分析證明重組菌構建成功.通過對重組菌生物學特性進行初步研究,錶明突變株生長能力未受影響,對小鼠毒力顯著降低.該突變株構建體繫的建立為豬傳染性胸膜肺炎減毒活疫苗的開髮及對胸膜肺炎放線桿菌新基因的功能研究奠定瞭良好基礎.
통과접합전이화SacB부향사선방법,성공구건료일주apxⅡC결실적혈청7형흉막폐염방선간균중조균주.수선구건중조전이질립pEHA1.장pEHA1전화공체균대장간균(E. coli β2155),병장기여야생형APP혈청7형친본균혼합배양약5h,연후도도함록매소항성적배양기배양,도취양성극륭,접충도무항성액체배양기,배양후도우함유자당적적고체배양기,배양일정시간후도취자당항성적극륭,즉가득도목적돌변주.통과PCR、유전은정성、외독소분비、중조위점서렬분석증명중조균구건성공.통과대중조균생물학특성진행초보연구,표명돌변주생장능력미수영향,대소서독력현저강저.해돌변주구건체계적건립위저전염성흉막폐염감독활역묘적개발급대흉막폐염방선간균신기인적공능연구전정료량호기출.
