中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2007年
10期
985-987
,共3页
陈焰%贾柳萍%黄腊平%田德英
陳燄%賈柳萍%黃臘平%田德英
진염%가류평%황석평%전덕영
肝炎病毒%病毒融合蛋白质%真核表达%凋亡%增殖
肝炎病毒%病毒融閤蛋白質%真覈錶達%凋亡%增殖
간염병독%병독융합단백질%진핵표체%조망%증식
目的 构建表达戊型肝炎病毒(HEV)ORF3-pXF2RH融合蛋白的真核表达载体;获得重组质粒稳定转染的L02细胞系.方法 利用PCR技术从HEV基因组中扩增出ORF3基因片断,Hind Ⅲ/EcolⅠ双酶切后连接到经同样酶切的pXF2RH真核表达载体,转化DH5α菌株感受态细胞,获得阳性重组质粒ORF3-pXF2RH.将阳性克隆用脂质体法转染L02细胞系,G418筛选抗性克隆,SDS-PAGE、Western blot分析鉴定ORF3-pXF2RH融合蛋白的表达.结果 真核表达质粒转染L02细胞,SDS-PAGE显示在28.5kD左右蛋白表达量明显高于对照组,Western blot在28.5kD左右有一条强的棕色条带.结论 成功构建ORF3-pXF2RH真核表达质粒,在L02细胞表达融合蛋白,为进一步研究该蛋白生物学功能奠定了基础.
目的 構建錶達戊型肝炎病毒(HEV)ORF3-pXF2RH融閤蛋白的真覈錶達載體;穫得重組質粒穩定轉染的L02細胞繫.方法 利用PCR技術從HEV基因組中擴增齣ORF3基因片斷,Hind Ⅲ/EcolⅠ雙酶切後連接到經同樣酶切的pXF2RH真覈錶達載體,轉化DH5α菌株感受態細胞,穫得暘性重組質粒ORF3-pXF2RH.將暘性剋隆用脂質體法轉染L02細胞繫,G418篩選抗性剋隆,SDS-PAGE、Western blot分析鑒定ORF3-pXF2RH融閤蛋白的錶達.結果 真覈錶達質粒轉染L02細胞,SDS-PAGE顯示在28.5kD左右蛋白錶達量明顯高于對照組,Western blot在28.5kD左右有一條彊的棕色條帶.結論 成功構建ORF3-pXF2RH真覈錶達質粒,在L02細胞錶達融閤蛋白,為進一步研究該蛋白生物學功能奠定瞭基礎.
목적 구건표체무형간염병독(HEV)ORF3-pXF2RH융합단백적진핵표체재체;획득중조질립은정전염적L02세포계.방법 이용PCR기술종HEV기인조중확증출ORF3기인편단,Hind Ⅲ/EcolⅠ쌍매절후련접도경동양매절적pXF2RH진핵표체재체,전화DH5α균주감수태세포,획득양성중조질립ORF3-pXF2RH.장양성극륭용지질체법전염L02세포계,G418사선항성극륭,SDS-PAGE、Western blot분석감정ORF3-pXF2RH융합단백적표체.결과 진핵표체질립전염L02세포,SDS-PAGE현시재28.5kD좌우단백표체량명현고우대조조,Western blot재28.5kD좌우유일조강적종색조대.결론 성공구건ORF3-pXF2RH진핵표체질립,재L02세포표체융합단백,위진일보연구해단백생물학공능전정료기출.
