CAJ | 학술논문

为研究层粘连蛋白(laminin,LN)促进肿瘤细胞生长作用,采用脉冲标记计数有丝分裂百分率(percentage labeling mitosis,PLM)法测得体外培养人胃癌(BGC-823)细胞周期时间为41 h,其中G1期时间为24.5 h.分裂细胞脱离法获取分裂期细胞,继续培养23 h,在细胞运行进入G1晚期时,将其置于LN 0、0.11、0.55、1.10 μmol/L基质上孵育4 h;细胞荧光光度计检测晚G,期细胞内Ca2+浓度、钙调蛋白、DNA含量.结果显示,LN与其膜上受体结合后引起细胞内Ca2+浓度、钙调蛋白、DNA含量增加,尤以在0.55 μmol/L LN作用显著(P＜0.001).蛋白质免疫印迹分析证明,cPKC-α呈现表达,提示LN与其受体结合可增强其细胞cPKC.α的活性;分析G1期细胞周期蛋白E(cyclinE)、细胞周期蛋白依赖性激酶CDK2表达水平,呈现逐渐增强的趋势;LN可诱导c-Myc蛋白呈现高表达,提後示LN与其受体结合增强与细胞增殖密切相关的基因表达;在LN作用前后的BGC-823细胞均未检测到Bax蛋白表达.结果提示,在人胃癌(BGC-823)细胞G1/S期交界处,层粘连蛋白与其膜上受体结合引起细胞内Ca2+浓度升高,诱导钙调蛋白的释放,其含量增加,增强蛋白激酶C的活化,导致细胞内DNA含量增加、G1/S期细胞周期蛋白与CDK表达增强、诱导原癌基因c-Myc呈持续表达状态,而凋亡基因Bax不表达.
위연구층점련단백(laminin,LN)촉진종류세포생장작용,채용맥충표기계수유사분렬백분솔(percentage labeling mitosis,PLM)법측득체외배양인위암(BGC-823)세포주기시간위41 h,기중G1기시간위24.5 h.분렬세포탈리법획취분렬기세포,계속배양23 h,재세포운행진입G1만기시,장기치우LN 0、0.11、0.55、1.10 μmol/L기질상부육4 h;세포형광광도계검측만G,기세포내Ca2+농도、개조단백、DNA함량.결과현시,LN여기막상수체결합후인기세포내Ca2+농도、개조단백、DNA함량증가,우이재0.55 μmol/L LN작용현저(P＜0.001).단백질면역인적분석증명,cPKC-α정현표체,제시LN여기수체결합가증강기세포cPKC.α적활성;분석G1기세포주기단백E(cyclinE)、세포주기단백의뢰성격매CDK2표체수평,정현축점증강적추세;LN가유도c-Myc단백정현고표체,제후시LN여기수체결합증강여세포증식밀절상관적기인표체;재LN작용전후적BGC-823세포균미검측도Bax단백표체.결과제시,재인위암(BGC-823)세포G1/S기교계처,층점련단백여기막상수체결합인기세포내Ca2+농도승고,유도개조단백적석방,기함량증가,증강단백격매C적활화,도치세포내DNA함량증가、G1/S기세포주기단백여CDK표체증강、유도원암기인c-Myc정지속표체상태,이조망기인Bax불표체.