生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2007年
5期
774-777
,共4页
霍惠玲%李永清%赵燕岭%张莉%章振华
霍惠玲%李永清%趙燕嶺%張莉%章振華
곽혜령%리영청%조연령%장리%장진화
禽流感病毒NS1抗原%重组抗原%纯化
禽流感病毒NS1抗原%重組抗原%純化
금류감병독NS1항원%중조항원%순화
目的:摸索出最佳分离纯化和复性重组禽流感病毒NS1抗原的方法,得到高纯度的重组蛋白.方法:将重组质粒pET32a-NS1转染大肠杆菌BL21(DE3)后获得表达,分别以尿素变性、复性,Ni-NTA His.Bind Resin亲和,以及脱氧胆酸钠-N-十二烷基肌氨酸钠(DOC-SKL)洗涤溶解等3种纯化方法从表达产物包涵体中分离纯化NS1蛋白,并进行比较研究.结果:原核表达得到相对分子质量约45 000的目的蛋白;3种纯化方法均能分离和纯化出NS1重组蛋白,其中尿素纯化的蛋白纯度为50%～60%,Ni-NTA His.Bind Resin亲和纯化的蛋白纯度为80%～90%,DOC-SKL纯化的蛋白纯度达95%以上;Western blot检测表明,复性后的纯化蛋白具有良好的生物学活性.结论:应用十二烷基肌氨酸钠洗涤纯化是最佳的纯化NS1蛋白的方法,所获得的蛋白可作为包被ELISA的抗原.
目的:摸索齣最佳分離純化和複性重組禽流感病毒NS1抗原的方法,得到高純度的重組蛋白.方法:將重組質粒pET32a-NS1轉染大腸桿菌BL21(DE3)後穫得錶達,分彆以尿素變性、複性,Ni-NTA His.Bind Resin親和,以及脫氧膽痠鈉-N-十二烷基肌氨痠鈉(DOC-SKL)洗滌溶解等3種純化方法從錶達產物包涵體中分離純化NS1蛋白,併進行比較研究.結果:原覈錶達得到相對分子質量約45 000的目的蛋白;3種純化方法均能分離和純化齣NS1重組蛋白,其中尿素純化的蛋白純度為50%～60%,Ni-NTA His.Bind Resin親和純化的蛋白純度為80%～90%,DOC-SKL純化的蛋白純度達95%以上;Western blot檢測錶明,複性後的純化蛋白具有良好的生物學活性.結論:應用十二烷基肌氨痠鈉洗滌純化是最佳的純化NS1蛋白的方法,所穫得的蛋白可作為包被ELISA的抗原.
목적:모색출최가분리순화화복성중조금류감병독NS1항원적방법,득도고순도적중조단백.방법:장중조질립pET32a-NS1전염대장간균BL21(DE3)후획득표체,분별이뇨소변성、복성,Ni-NTA His.Bind Resin친화,이급탈양담산납-N-십이완기기안산납(DOC-SKL)세조용해등3충순화방법종표체산물포함체중분리순화NS1단백,병진행비교연구.결과:원핵표체득도상대분자질량약45 000적목적단백;3충순화방법균능분리화순화출NS1중조단백,기중뇨소순화적단백순도위50%～60%,Ni-NTA His.Bind Resin친화순화적단백순도위80%～90%,DOC-SKL순화적단백순도체95%이상;Western blot검측표명,복성후적순화단백구유량호적생물학활성.결론:응용십이완기기안산납세조순화시최가적순화NS1단백적방법,소획득적단백가작위포피ELISA적항원.
